免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）技术在现代病理诊断中扮演着重要角色，尤其是在肿瘤的诊断与预后评价方面。p16与Ki67作为两种常用的细胞标志物，其双重染色的结合提供了更丰富的病理信息，可以更准确地判断疾病性质及预后。

P16蛋白

p16（全称：p16INK4a）是一种肿瘤抑制蛋白，由CDKN2A基因编码。它是细胞周期G1期检查点的重要调节因子，通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4和CDK6的活性，阻止视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）的磷酸化，从而使Rb保持活性状态，结合并抑制转录因子E2F，进而阻碍细胞从G1期向S期转化，最终导致细胞周期阻滞。

正常细胞中，p16的表达水平较低。然而，当细胞的Rb通路受到损伤或失活时，细胞会失去G1期检查点的控制，p16的负反馈调节机制被解除，导致p16蛋白代偿性过表达。这种过表达是细胞尝试阻止不受控制的增殖，但往往已无力回天。在肿瘤病理学中，p16的强阳性表达常与Rb通路的失活相关，尤其是在高危型HPV感染引起的病变中，HPV E7癌蛋白与Rb蛋白结合并使其降解，从而导致p16的大量积累和过表达。

尽管p16在某些疾病中是重要的诊断标志物，但其单独应用存在局限性。一些非肿瘤性病变（如萎缩、炎症、修复性改变）或某些其他肿瘤也可能出现p16的阳性表达，导致假阳性或诊断特异性不高的问题。

Ki67蛋白

Ki67是一种核蛋白，与细胞增殖密切相关。它在细胞周期的G1、S、G2和M期均有表达，但在G0期（静止期）不表达。因此，Ki67的表达水平可以直观地反映组织中活跃增殖细胞的比例，是评估肿瘤生长速度和预后的重要指标。Ki67标记指数通常以阳性细胞的百分比来表示，即Ki67阳性细胞数占总细胞数的比例。

 

 

图 1 Regulation of cell cycle by Ki-67

Ki67在多种肿瘤的诊断、分级和预后判断中都有广泛应用，例如乳腺癌、淋巴瘤等。较高的Ki67指数通常提示肿瘤具有更强的侵袭性和更差的预后。

然而，Ki67单独应用同样有其局限性。高Ki67指数并不总是意味着恶性肿瘤，一些良性增生性病变、炎症反应或修复性过程也可能表现出较高的Ki67阳性率。因此，仅凭Ki67的表达高低难以区分良恶性病变，也无法特异性地指出某种特定的肿瘤驱动机制。

 

 

图 2 Ki67癌症组织的阳性染色（以人甲状腺癌为例） 货号：S0B2332

P16和Ki67双强结合，锁定宫颈癌变

p16/Ki67双染目前最广泛且最成熟的应用是在HPV相关病变

- 宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌前病变：

区分低级别病变（LSIL/CIN1）与高级别病变（HSIL/CIN2/3）：这是p16/Ki67双染最重要的应用之一。高级别病变通常表现为p16弥漫性强阳性，并伴有增殖区扩展的Ki67阳性（通常延伸至上皮厚度的中上1/3以上）；而低级别病变或良性病变则表现为p16阴性或局灶性弱阳性，Ki67阳性局限于上皮下1/3。

鉴别真假CIN2：宫颈病变中，CIN2的诊断标准存在一定主观性。p16/Ki67双染有助于区分"真性"CIN2（有高级别病变生物学潜能）和"假性"CIN2（形态学介于CIN1和CIN3之间，但生物学行为更倾向于CIN1）。

辅助诊断不典型鳞状细胞（ASC-US/ASC-H）：对于细胞学或活检病理学诊断不明确的病例，双染有助于评估病变的潜在恶性风险。

鉴别良性病变（如萎缩、修复性改变、炎症）与高级别病变：良性病变通常p16阴性或弱阳性，Ki67局限于基底层。

- 其他HPV相关鳞状细胞癌及其前驱病变：

肛管上皮内瘤变（AIN）和肛管癌。
口咽部鳞状细胞癌（特别是扁桃体、舌根部）。
外阴和阴道上皮内瘤变（VIN/VaIN）。

这些部位的HPV相关病变在诊断和分级上同样可以借鉴宫颈病变的判读标准。

 

 

图 3 .p16/Ki‑67 免疫细胞化学阳性染色结果的判断标准

1）、p16 细胞质/细胞核呈棕色，Ki‑67 细胞核呈红色 免疫细胞化学 高倍放大
2）、p16 显示细胞质/细胞核呈红色/玫红色， Ki‑67 细胞核呈棕色 免疫细胞化学 高倍放大
3）、仅有 p16 细胞质和/或细胞核染色（棕色）的宫颈上皮细胞 免疫细胞化学 高倍放大
4）、仅有 Ki‑67细胞核染色（红色）的宫颈上皮细胞 免疫细胞化学 高倍放大
5）& 6）、细胞簇中 Ki‑67着色细胞核与p16着色细胞质不在同一聚焦平面，判读结果为阴性 免疫细胞化学 高倍放大
7）& 8 ）、细胞簇中Ki‑67染色细胞核嵌入p16染色细胞质中，即在同一聚焦平面，判读结果为阳性 免疫细胞化学 高倍放大

如何判断p16/Ki67双染结果？

p16/Ki67双染的判读需要结合形态学、染色强度、阳性细胞的比例、以及阳性细胞在组织中的分布模式。

核心判读标准：是否存在p16和Ki67在同一细胞内的共表达，以及这种共表达的范围和模式。

以下为常见的几种判读模式：

p16+/Ki67+（双阳性）：
表现：细胞核同时显示棕色（p16）和红色（Ki67）染色，或红色Ki67叠加在棕色p16上。
解读：这是最具诊断意义的模式。它表明该细胞的Rb通路失活（p16过表达）且处于活跃增殖状态。在宫颈病变中，如果双阳性细胞弥漫分布于上皮的2/3以上，且伴有形态学异型性，强烈提示高级别上皮内病变（HSIL/CIN2/3）或浸润性癌。这种共表达是HPV感染导致细胞恶性转化过程中的关键特征。

p16-/Ki67+（Ki67单阳性）：
表现：细胞核仅显示红色（Ki67）染色，而无p16棕色染色。
解读：提示细胞处于增殖状态，但p16通路正常或未因Rb失活而过表达。常见于：
低级别病变（LSIL/CIN1）：Ki67阳性细胞通常局限于上皮的下1/3。
炎症、修复性改变或良性增生性病变：基底层或反应性增生的细胞Ki67阳性。
非HPV相关肿瘤：肿瘤细胞增殖，但p16不是主要的驱动因素。
意义：具有一定的增殖活性，但缺乏高级别病变或HPV相关恶性转化的特异性证据。

p16+/Ki67-（p16单阳性或Ki67低表达）：
表现：细胞核仅显示棕色（p16）染色，Ki67阴性或阳性细胞极少。
解读：提示p16过表达，但细胞增殖不活跃。可能见于：
部分良性病变或萎缩性改变的局部p16阳性。
一些特殊类型的肿瘤（如鳞状上皮癌，并非所有p16过表达的癌细胞都处于高增殖状态）。
意义：单独的p16阳性而Ki67不活跃，通常不支持高级别HPV相关病变的诊断。

p16-/Ki67-（双阴性）：
表现：细胞核无棕色和红色染色。
解读：正常、静止期的细胞或非增殖性病变。

宫颈病变中的具体判读策略：

- 诊断HSIL/CIN2/3（需满足以下至少一项标准）：
p16弥漫性强阳性，且Ki67阳性细胞延伸至上皮的2/3以上，并可见双阳性细胞。
p16弥漫性强阳性，伴有形态学异型性。
p16弥漫性阳性，伴有Ki67在整个上皮层异常表达（例如，从基底层延伸至上皮表面）

- 诊断LSIL/CIN1：通常p16阴性或局灶性弱阳性，Ki67阳性细胞局限于上皮下1/3，且无双阳性细胞或仅极少量散在双阳性细胞。

- 诊断良性病变（如炎症、萎缩）：p16阴性或仅基底层弱阳性，Ki67阳性局限于基底层。

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CDKN2A/p16 INK4A Recombinant Mouse mAb (SDT-4675) (货号：S0B2479）

 

 

图 4人子宫内膜癌组织呈阳性染色

p16 Recombinant Rabbit mAb (SDT-303-206) 抗体货号：S0B2339

 

 

其他热门肿瘤检测病理重组兔单抗

 

 

货号	产品名称	反应种属	应用
S0B2095	S-RMab® AFP Recombinant Rabbit mAb (SDT-R077)	Hu	IHC-P, ICC, WB, IP
S0B2163	S-RMab® alpha smooth muscle Actin (SMA) Recombinant Rabbit mAb (SDT-301-142)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, WB, IF
S0B2181	S-RMab® Bcl-2 Recombinant Rabbit mAb (SDT-R160)	Hu	IHC-P, WB
S0B2093	S-RMab® BCL-6 Recombinant Rabbit mAb (SDT-103-21)	Hu	IHC-P, ICC, WB, FC(Intra)
S0B2084	S-RMab® CD117 Recombinant Rabbit mAb (SDT-125-51)	Hu	IHC-P, FC(Intra), IF
S0B2050	S-RMab® CD14 Recombinant Rabbit mAb(SDT-060-50)	Hu	IHC-P, FC, ICC, WB, IP
S0B2194	S-RMab® CD163 Recombinant Rabbit mAb (SDT-R164)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, WB, IP, IF
S0B2184	S-RMab® CD16a Recombinant Rabbit mAb (SDT-366-45)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, FC(Intra), IF
S0B2125	S-RMab® CD16a Recombinant Rabbit mAb (SDT-R099)	Hu	IHC-P
S0B2158	S-RMab® CD20 Recombinant Rabbit mAb (SDT-R133)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, ICC, WB
S0B2043	S-RMab® CD21 Recombinant Rabbit mAb(SDT-007-47)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, FC, ICC, WB
S0B2196	S-RMab® CD3 epsilon Recombinant Rabbit mAb (SDT-R137)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, WB, IP
S0B2038	S-RMab® CD38 Recombinant Rabbit mAb (SDT-031-45-2)	Hu	IHC-P, FC, ICC, WB
S0B2228	S-RMab® CD44 Recombinant Rabbit mAb (SDT-R107)	Hu	IHC-P, ICC, WB
S0B2087	S-RMab® CD45 Recombinant Rabbit mAb (SDT-R035)	Hu	IHC-P, ICC, WB
S0B2195	S-RMab® CD68 Recombinant Mouse mAb (SDT-R146)	Hu	IHC-P, ICC
S0B2307	S-RMab® CD8α Mouse mAb (SDT-1036-34)	Hu	IHC-P, ICC, FC(Extra), IF
S0B2192	S-RMab® Chromogranin A Recombinant Rabbit mAb (SDT-074-57)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, WB, IP
S0B2138	S-RMab® CK5/6 Recombinant Rabbit mAb (SDT-P004)	Hu	IHC-P, WB, IF
S0B2119	S-RMab® CK-HMW Recombinant Rabbit mAb (SDT-P002)	Hu	IHC-P, WB, IF
S0B2118	S-RMab® CK-Pan Recombinant Rabbit mAb (SDT-P001)	Hu	IHC-P, WB, IF
S0B2070	S-RMab® Claudin18.2 Recombinant Rabbit mAb (SDT-102-83)	Hu, Ms, Rt	IHC-P
S0B2052	S-RMab® c-Met Recombinant Rabbit mAb (SDT-009-7H0L0)	Hu	IHC-P, WB
S0B2165	S-RMab® c-Myc Recombinant Rabbit mAb (SDT-R138)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, ICC, WB, FC(Intra)
S0B2121	S-RMab® Collagen IV Recombinant Rabbit mAb (SDT-150-49)	Hu	IHC-P, IF
S0B2057	S-RMab® Cytokeratin 7 Recombinant Rabbit mAb (SDT-121-17)	Hu	IHC-P, FC, ICC, WB, IP, IF
S0B2112	S-RMab® E-Cadherin Recombinant Rabbit mAb (SDT-R088)	Hu	IHC-P, ICC, WB
S0B2028	S-RMab® EpCAM Recombinant Rabbit mAb(SDT-078-13)	Hu	IHC-P, ICC, WB, IF
S0B2074	S-RMab® ErbB2 Recombinant Rabbit mAb (SDT-069-57)	Hu	IHC-P, ICC, WB, IF
S0B2309	S-RMab® ErbB3 Recombinant Rabbit mAb (SDT-991-10)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, WB, IP
S0B2264	S-RMab® Factor XIIIa Recombinant Rabbit mAb (SDT-R278)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, WB, IP
S0B2232	S-RMab® FGFR2b Recombinant Rabbit mAb (SDT-423-33)	Hu	IHC-P, WB, FC(Extra)
S0B2193	S-RMab® FOXP3 Recombinant Mouse mAb (SDT-R149)	Hu	IHC-P, WB
S0B2007	S-RMab® GCDFP-15 Recombinant Rabbit mAb (SDT-010-579)	Hu	IHC-P, WB
S0B2102	S-RMab® GLUT1 Recombinant Rabbit mAb (SDT-047-53)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, ICC, WB, FC(Intra)
S0B2268	S-RMab® GST-π Recombinant Rabbit mAb (SDT-561-78)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, ICC, WB, FC(Intra)
S0B2252	S-RMab® Helicobacter pylori Recombinant Rabbit mAb (SDT-R273)	Helicobacter pylori	IHC-P, IF
S0B2098	S-RMab® Keratin 10 Recombinant Rabbit mAb (SDT-R067)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, WB
S0B2011	S-RMab® Keratin 14 Recombinant Rabbit mAb (SDT-023-12)	Hu, Ms	IHC-P, ICC, WB, FC(Intra)
S0B2131	S-RMab® Keratin 18 Recombinant Rabbit mAb (SDT-012-7)	Hu, Ms, Rt	IHC-P, ICC, WB, IP, FC(Intra)
S0B0001E	S-RMab® Ki67 Recombinant Rabbit mAb (SDT-10002)	Hu	IHC-P
S0B1019	S-RMab® MCM2 Recombinant Rabbit mAb (SDT-018-68)	Hu, Ms	IHC-P, ICC, WB, FC(Intra)