路书领航，磁珠分选稳当当
作者：斯达特高级产品经理 浏览次数：32
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做过细胞分选的科研人都懂，磁珠分选看似步骤简单，却总容易因为细节翻车：纯度不够、细胞回收率低、操作手忙脚乱…… 路书领航员上线again,超详细磁珠分选实操指南，从试剂准备到流式验证，全程 step by step 拆解，稳稳拿下高纯度样本！
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路书领航，磁珠分选稳当当~
做过细胞分选的科研人都懂，磁珠分选看似步骤简单，却总容易因为细节翻车：纯度不够、细胞回收率低、操作手忙脚乱......
路书领航员上线again，超详细磁珠分选实操指南，从试剂准备到流式验证，全程 step by step 拆解，稳稳拿下高纯度样本！
Mouse小鼠脾脏磁珠分选流程图
磁珠分选技术全流程
一、实验前准备-全套试剂耗材
二、磁珠分选步骤参考（以小鼠脾脏为例）
• 实验思路框架
| 样本来源 | C57 Mouse |
| 取材 | Spleen |
| 样本处理 | 通过研磨加裂红方式处理为单细胞悬液 |
| 分选目的细胞 | - CD11B+ Myloid髓系细胞 - F4/80 MacroPhage巨噬细胞 |
• 实验所用试剂耗材
| 产品分类 | 产品编号 | 名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| Myloid髓系分选磁珠 | S0K0007 | CD11b NanoBeads, human and mouse（RUO） | 1ml/2ml |
| 巨噬细胞分选磁珠 | S0K0012 | Anti-F4/80 Nanobeads, mouse（RUO） | 1ml/2ml |
| 分选器/磁铁 | S0D3004 | Starter MagSep Separator (8S) | 盒 |
| 分选柱 | S0D3012 | S Separation Columns | 25个/盒 |
| 分选架 | S0D3005 | MultiStand | 个 |
| 分选Buffer | S0D3018 | Starter MagSep Separation Buffer | 250ml |
| 筛网 | abs7232 | 70um细胞筛网（200目，白色，底面过滤） | 50个/箱 |
| 红细胞裂解液（1×） | abs9101 | RBC Lysis Buffer | 100ml |
| 阻断FCR非特异性染色 | S0B0599 | Mouse FcR Blocking Reagent | 200T |
| 染色缓冲液 | abs9475 | Flow cytometry staining buffer | 500ml |
| 流式鉴定 | 563168 | BV711 Rat Anti-CD11b | 50ug |
| 流式鉴定 | 565411 | BV421 Rat Anti-Mouse F4/80 | 50ug |
1、分选Buffer预处理：关键步骤勿省略！
- 开启超声仪，对分选 Buffer 进行超声去气约10min
- 去气完成后，将Buffer预冷至 2~8℃，备用
2、细胞计数&活率测定
- 提前制备完成单细胞悬液
- 取10-20μL细胞悬液，与等体积的 台盼蓝染液（0.4%） 混合
- 取适量混合液（通常10μL）加入计数仪专用的一次性计数载玻片
- 将载玻片插入仪器，自动分析细胞总浓度（cells/mL）、活细胞浓度和活率百分比
3、分选柱润洗及磁性标记
- 准备分选柱：选择合适的分选柱（如MS、LS、LD柱），将其置于磁性分选器上。用3 mL 缓冲液润洗柱子。
- 细胞计数后，300×g 离心 10min，弃上清
- 每 1×10⁷细胞加 90 μL 缓冲液重悬每 1×10⁷细胞：90μL 缓冲液重悬 + 10μL 磁珠，2~8℃孵育 15min
4、磁性分离
- 上样：将标记后的细胞悬液加载到分选柱上（未标记细胞）。
- 洗涤与收集：根据实验需求分管收集
- 阴性分选（去除非目标细胞）：目标细胞未结合磁珠，会直接流穿分选柱。收集流穿液，即为富集的目标细胞。
- 阳性分选（直接获取目标细胞）：目标细胞结合磁珠并被吸附在柱内。
- 缓冲液洗涤柱子 3 次，每次 3 mL，待柱内液体完全流空后再加下一次。合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上。
- 向柱内加入 5 mL 缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞
5、流式验证：分选效果金标准
取适量细胞用荧光抗体染色，上流式细胞仪检测分选纯度，这是验证分选效果的金标准。
未分选前小鼠CD11b
分选后小鼠CD11b（用量20ul）
分选后小鼠CD11b（用量10ul）
未分选前小鼠F4/80
分选后小鼠F4/80（用量10ul）
分选后小鼠F4/80（用量5ul）
三、小优有妙计--新手避坑核心要点
1. 磁珠分选实验前，分选Buffer超声去气有必要吗？
超声去气的首要目的是去除缓冲液中的溶解气体。避免缓冲液过柱时因压力变化析出气泡。在分选柱的基质中形成微小气泡。气泡易堵塞分选柱空隙，造成流速变慢甚至堵柱，还会干扰细胞结合与洗脱，降低分选纯度和细胞回收率。所以实验全程（加样、孵育、过柱）需注意不要出现气泡，有气泡需要及时吸出。
超声去气的首要目的是去除缓冲液中的溶解气体。避免缓冲液过柱时因压力变化析出气泡。在分选柱的基质中形成微小气泡。气泡易堵塞分选柱空隙，造成流速变慢甚至堵柱，还会干扰细胞结合与洗脱，降低分选纯度和细胞回收率。所以实验全程（加样、孵育、过柱）需注意不要出现气泡，有气泡需要及时吸出。
2. 磁珠分选，什么时候选择阳性分选，什么时候选择阴性分选？
如果下游是功能研究，推荐优先使用阴性分选，以确保细胞功能不受分选过程的影响。
如果追求高纯度、速度快，且下游实验对细胞激活不敏感，阳性分选是更直接的选择。
对于非常稀有或复杂的细胞（如肿瘤浸润淋巴细胞），也可采用 "复合分选"策略：先阴性分选去除大量杂质（如B细胞、巨噬细胞等）进行"预富集"，再对富集后的细胞进行阳性分选，以获得超高纯度。
如果下游是功能研究，推荐优先使用阴性分选，以确保细胞功能不受分选过程的影响。
如果追求高纯度、速度快，且下游实验对细胞激活不敏感，阳性分选是更直接的选择。
对于非常稀有或复杂的细胞（如肿瘤浸润淋巴细胞），也可采用 "复合分选"策略：先阴性分选去除大量杂质（如B细胞、巨噬细胞等）进行"预富集"，再对富集后的细胞进行阳性分选，以获得超高纯度。
更多磁珠分选产品（部分List展示），欢迎选购~
| 分选 | 斯达特货号 | 品名 |
|---|---|---|
| 阳性分选-有柱式 | S0K0004 | CD14 Nanobeads, human（RUO） |
| S0K0009 | Dead Cell Removal Set， (RUO) | |
| S0K0011 | CD3 Nanobeads, human（RUO） | |
| S0K0005 | CD8 Nanobeads, mouse（RUO） | |
| S0K0007 | CD11b NanoBeads, human and mouse（RUO） | |
| S0K0010 | CD8 Nanobeads, human（RUO） | |
| S0K0008 | Streptavidin Nanobeads | |
| S0K0012 | Anti-F4/80 Nanobeads, mouse（RUO） | |
| S0K0017 | CD49b Nanobeads, mouse（RUO） | |
| 阴性分选-有柱式 | S0K1008 | Mouse T Cell lsolation Kit (Column-Based) |
| S0K1009 | Human NK Cell Isolation Kit (Column-Based) | |
| S0K1005 | Mouse CD4 T Cell lsolation Kit (Column-Based） | |
| S0K1002 | Mouse Naive CD8 T Cell lsolation Kit (Column-Based) | |
| S0K1004 | Human T Cell lsolation Kit (Column-Based) | |
| 阴性分选-无柱式 | S0K3006 | Mouse T Cell lsolation Kit ( Column-Free) |
| S0K3005 | Mouse Naive CD8 T Cell lsolation Kit (Column-Free) | |
| S0K3001 | Human NK Cell lsolation Kit (Column-Free) | |
| S0K3002 | Human T Cell lsolation Kit (Column-Free) |
产品信息
本文由斯达特技术专家团审核发布
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杭州斯达特 (www.starter-bio.com)是优宁维旗下品牌，志在为全球生命科学行业提供优质的抗体、蛋白、试剂盒等产品及研发服务。依托多个开发平台：重组兔单抗、重组鼠单抗、快速鼠单抗、重组蛋白开发平台（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）、一步法ELISA平台，PTM泛修饰抗体平台，已正式通过欧盟98/79/EC认证、ISO9001认证、ISO13485认证。
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