Mouse Naïve CD8 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

步骤

操作说明

剂量和时间

1

取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；进行细胞计数;

Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；脾细胞可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×10⁷细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测初始naïve CD8比例；

1×10⁷ cells/100 μL

3

加入10 μL Mouse Naïve CD8 T cell Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL /100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 室温孵育10 min；

室温孵育10 min

5

震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads；

混匀5-30 s

6

加20 μL Streptavidin beads至样品中；

20 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5min；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

本步骤磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5min时，轻弹混匀一下；

室温孵育5min

8

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

9

样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附（3 min）

联排磁力架吸附（5 min）

10

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note: 1. 0.1-1 × 10⁸ cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；

2-5 ×10⁸ cells（2-5mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5mL；

2. 若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒去除死细胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）;