Dead Cell Removal Set, (RUO)

价格￥2,000.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 S0K0009

规格

0.5mL1mL

数量

产品介绍

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产品规格

储存条件

避光保存于2–8℃，不可冻存。
成分组成

1.偶联Annexin V His Tag Protein的葡聚糖包覆的四氧化三铁纳米磁珠，PBS缓冲体系含BSA及Poloxamer 188。
2.去死细胞试剂盒专用buffer。
分选能力

0.5 mL磁珠：适用于5×10⁸总细胞量，最多可完成50次分选
1 mL磁珠：适用于1×10⁹总细胞量，最多可完成100次分选
分选原理

Dead Cell Removal Set可识别凋亡细胞及死细胞质膜上的某一结构。在进行死细胞去除时，首先用Dead Cell Removal Nanobeads对细胞进行磁性标记，然后将细胞悬液通过分离柱。被磁性标记的死细胞被保留在分离柱内。未被标记的活细胞流过分选柱；因此，该细胞组分中已去除了死细胞。将分离柱从磁场中取出后，被磁性保留的死细胞可作为阳性选择细胞组分被洗脱下来。使用Dead Cell Removal Nanobeads，即使是细胞膜完整的早期凋亡细胞也可被去除。
分选应用

通过去除死细胞减少流式分选时间从细胞培养物中去除死细胞改善冰冻细胞的免疫细胞化学分析从组织中制备活的单细胞悬液从精子样本中去除死细胞在细胞转染前后去除死细胞
磁珠粒径

20 nm
分选方式

有柱分选
分选策略

阳性分选

背景介绍

Dead Cell Removal Set是一种从细胞培养物或组织制备物中去除死细胞的快速、简便方法。该试剂包含即用型纳米磁珠和结合缓冲液，用于对细胞碎片、死细胞及濒死细胞进行磁性标记。通过磁性分离去除磁性标记的物质，即可在短时间内获得纯净的活细胞。

操作步骤

以S Separation Column为例

	步骤	操作方法	剂量 / 时间
磁性标记	1	计数细胞总数 Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数	—
	2	细胞悬液400×g离心7分钟，完全吸弃上清	400×g,7 min
	3	每1×10⁷细胞加90 μL 1× Binding Buffer重悬 Note: 20×Binding Buffer必须仅使用无菌双蒸水稀释至1× Binding Buffer后添加1%的BSA	重悬细胞
	4	每1×10⁷细胞加10 μL Dead Cell Removal NanoBeads Note：Dead Cell Removal NanoBeads的结合需要Ca²⁺。离子螯合剂EDTA的存在会影响结合	1×10⁷细胞加 10 μL
	5	充分混匀，20–25℃孵育15min	孵育15 min
	6	（可选）如有必要，向细胞悬液中加入1×结合缓冲液，使体积至少达到500 μL 以进行分离	—
磁性分选	7	将S型分选柱放入对应磁力分选器磁场中，500 μL缓冲液润洗分选柱	润洗分选柱
	8	将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（活细胞）	收集活细胞
	9	缓冲液洗涤柱子3次，每次500 μL，待柱内液体完全流空后再加下一次，合并所有流出液为阴性组分	收集活细胞
	10	将分选柱移出磁场，置于收集管上	—
	11	向柱内加入1mL缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞 Note：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次	收集标记细胞

以L Separation Column为例

	步骤	操作方法	剂量 / 时间
磁性标记	1	计数细胞总数 Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数	—
	2	细胞悬液400×g离心7分钟，完全吸弃上清	400×g,7 min
	3	每1×10⁷细胞加90 μL 1× Binding Buffer重悬 Note: 20×Binding Buffer必须仅使用无菌双蒸水稀释至1× Binding Buffer后添加1%的BSA	重悬细胞
	4	每1×10⁷细胞加10 μL Dead Cell Removal NanoBeads Note：Dead Cell Removal NanoBeads的结合需要Ca²⁺。离子螯合剂EDTA的存在会影响结合	1×10⁷细胞加 10 μL
	5	充分混匀，20–25℃孵育15min	孵育15 min
	6	（可选）如有必要，向细胞悬液中加入1×结合缓冲液，使体积至少达到500 μL 以进行分离	—
磁性分选	7	将L型分选柱放入对应磁力分选器磁场中，3 mL缓冲液润洗分选柱	润洗分选柱
	8	将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（活细胞）	收集活细胞
	9	缓冲液洗涤柱子3次，每次3 mL，待柱内液体完全流空后再加下一次，合并所有流出液为阴性组分	收集活细胞
	10	将分选柱移出磁场，置于收集管上	—
	11	向柱内加入5 mL缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞 Note：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次	收集标记细胞