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产品中心 有柱分选 阴性分选

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Human NK Cell Isolation Kit (Column-Based)

价格 ￥6,000.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 S0K1009
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产品介绍

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产品规格

  • 反应种属 ?

    Human

  • 储存条件

    避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

  • 成分组成

    1 mL Human NK Cell Biotin-Antibody Cocktail

    2mL Streptavidin Beads

  • 分选能力

    适用于 1×10⁹ 总细胞量，最多可完成100次分选。

  • 分选原理

    在该负选流程中，通过生物素偶联的抗体标记非NK细胞，再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育，非目的细胞通过抗体复合物与磁珠被标记，而目标NK细胞保持未标记状态。随后将细胞悬液转移至分选柱上，在磁场作用下，被磁性标记的非目标细胞吸附在分选柱中，未被标记的NK细胞在重力作用下滴落到收集管中，该上清液即为去除非目标细胞后的 NK细胞富集组分。

  • 磁珠粒径

    20 nm

  • 分选方式

    有柱分选

  • 分选策略

    阴性分选
背景介绍

  • Human NK 细胞（Natural Killer Cells）是固有免疫核心效应细胞，占外周血淋巴细胞5%–20%，无需抗原致敏即可直接杀伤病毒感染细胞与肿瘤细胞，并分泌大量细胞因子调控免疫应答，是肿瘤免疫、抗感染免疫与免疫治疗的关键研究对象。通过NK细胞负选分离试剂盒分离得到的NK细胞，适用于表面分子直接标记可能干扰下游应用的研究场景；目的NK细胞可立即用于流式细胞术、培养或DNA/RNA提取等下游应用。

操作步骤
  • Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为 S0D3018

    以L Separation Column为例

    步骤

    操作说明

    剂量和时间

    细胞处理及标记

    1

    从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离 PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数。

    Note: 推荐细胞采用 AO/PI 染色后进行计数；PBMC可以采用400 g离心7 min；

    制备样本

    2

    用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

    Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human NK细胞比例；

    1×107 cells/100 μL

    3

    加入10 μL Human NK cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀；

    Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

    10 μL/100 μL

    4

    Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min；

    室温孵育10 min

    5

    混匀Streptavidin Beads，加20 μL Streptavidin Beads至样品中；

    20 μL/100 μL

    6

    轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5 min；

    室温孵育5 min

    细胞分选

    7

    在柱分选磁极中，装上L Separation Column，加入3 mL MagSep Separation Buffer，润洗分选柱；

    润洗分选柱

    8

    将细胞加入到分选柱中，并用收集管收集目的细胞；

    Note: 细胞体积最少为500 μL，不足则用MagSep Separation Buffer补齐；随重力滴落的细胞为目的细胞；

    收集目的细胞

    9

    加入3 mL MagSep Separation Buffer，收集目的细胞；

    Note: 本步骤洗脱分选柱未标记的目的细胞，提高得率。

    收集目的细胞

    Notes: 注意分选柱的最大承载量，S Separation Column标记细胞数最大为1×107；L Separation Column最大标记细胞数为1×108；


  • 验证数据

    • 从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Human NK细胞。细胞经CD56-Alexa Fluor® 647 (SDT Cat: S0B8402) 和CD3-Alexa Fluor® 488 (SDT Cat: S0B1636)荧光染色后，以活细胞（Live+）设门进行分析, 流式细胞术检测结果表明，本次分选后Human NK细胞纯度为91.6%。

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