蛋白乳酸化修饰是一种近年来新发现的、依赖乳酸作为底物的蛋白质翻译后修饰方式。其过程是，乳酸先转化为乳酰辅酶A，再在特定酶的催化下，将乳酰基共价连接到蛋白质（包括组蛋白和非组蛋白）的赖氨酸残基上。这种修饰如同一个“功能开关”，能够改变蛋白质的结构和功能，进而调控基因表达、细胞代谢、免疫反应等多种关键生理过程。值得注意的是，这个过程是动态可逆的，由专门的“写入酶”（例如P300）和“擦除器”（例如HDACs）共同精密调控。作为一个连接细胞代谢与基因调控的重要纽带，乳酸化修饰的异常与肿瘤、炎症、心血管疾病及神经退行性疾病等多种病理状态密切相关。

依据已有文献报到过的修饰，购买位点特异性抗体进行WB的实验，例如H3K18la（货号：S0B6743），H3K9la（货号：S0B0756）可是若我研究的蛋白全网没有Reference，岂不是我就要抓瞎？

当然我也可以用IP技术把目标蛋白富集下来，先利用乳酸化泛抗体(货号：S0B6731 & S0B0719）进行WB检测，然后我再进行定点突变（货号：210519），进一步确认修饰位点。

当然我们还有修饰组学的法宝，利用乳酸化修饰泛抗体的beads （货号：S0F0036）富集样本中的所有修饰肽段再进行质谱分析，实现一网打尽。

PLA通过一对标记寡核酸(单链DNA)的抗体探针，识别目的蛋白，当两个探针之间的距离靠近，产生了所谓的邻近效应（proximity）。加入一段与寡核酸互补的DNA序列，互补配对后进行扩增，从而显色，检测目标蛋白，蛋白相互作用等，这个突破了基于荧光的原位方法的界限，使研究人员能够在分子水平上原位可视化和量化蛋白质、它们的相互作用和修饰，从而从每次分析中获得最大信息。整个技术兼容ELISA的特异性和qPCR的灵敏度，通过荧光显微镜或共聚焦显微镜实现高效灵敏PTM信号检测。

PLA 技术在磷酸化修饰的检测中已有了一些应用。但是由于修饰泛抗尤其是前沿修饰泛抗研发难度较大，优质的修饰一抗反而成为了PLA在PTM应用上的障碍。但是斯达特依托专有重组兔单B细胞抗体重组技术开发了20+修饰泛抗。这些抗体均经过严格验证，可以满足WB IHC等多种应用，同时也提供修饰抗体定制服务。高性能的抗体从源头上解决了一抗对于PLA技术的阻碍，使PLA技术检测前沿修饰不再只是想象。

• Navinci PLA 试剂盒（货号：60025）
• 斯达特乳酸化泛抗体（货号：S0B0719, 重组兔单抗）
• 组蛋白H3 一抗(鼠单抗)
• 细胞系：HeLa cells + Lactate sodium处理

1. 细胞固定：4% PFA处理
2. 一抗孵育
3. PLA 专利二抗孵育: Navenibody M1 和 Navenibody R2 1:40稀释，在37℃中孵育60min
4. 扩增反应:
   • 添加 PLA Enzyme 1 1:40稀释在37℃中反应30min
   • 添加 PLA Enzyme 2 1:40稀释在37℃中反应90min (避光)
5. 染DAPI和封片
6. 使用荧光显微镜拍照

A、阳性样本

图 4 PLA在组蛋白H3乳酸化检测. 使用乳酸化泛抗体S0B0719（稀释比1:500）

B、阴性对照

 PLA 技术可以实现快速定位和检测目的蛋白是否产生乳酸化修饰，并且可以通过图像分析软件实现乳酸化修饰的定量分析，且该技术不依赖专有设备，实验室常见的荧光显微镜或共聚焦显微镜就可以实现拍片。
斯达特提供优质抗体搭配优宁维独家代理的Navinci PLA试剂盒助您乳酸化修饰研究！