纯度高达97.3%！斯达特无柱磁珠高效分选CD4⁺ T细胞
作者：斯达特高级产品经理 浏览次数：24
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斯达特无柱磁珠CD4⁺ T细胞分选试剂盒（Column-Free）测试结果表明：从小鼠脾脏单细胞悬液中分选CD4⁺ T辅助细胞，纯度高达97.3%。整个操作流程无需分离柱，仅需磁力架吸附3-5分钟即可完成，操作简便、细胞活率高，为免疫学研究、CAR-T制备及单细胞测序等下游应用提供了高效、可靠的细胞纯化方案。
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纯度高达97.3%！斯达特无柱磁珠高效分选CD4⁺ T细胞
一、实验思路
| 样本来源 | C57 Mouse |
| 取材 | Spleen |
| 样本处理 | 通过研磨加裂红方式处理为单细胞悬液 |
| 分选目的细胞 | CD4T辅助细胞 CD8T毒性细胞 |
二、实验材料准备
| 产品分类 | 产品编号 | 名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| CD4无柱阴选磁珠 | S0K3003 | Mouse CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free) | 100T |
| CD8无柱阴选磁珠 | S0K3004 | Mouse CD8 T Cell Isolation Kit (Column-Free) | 100T |
| CD4阴选试剂盒 | 19852 | EasySep™ Mouse CD4+ T Cell Isolation Kit | For processing 1 x 10^9 cells |
| CD8阴选试剂盒 | 19853 | EasySep™ Mouse CD8+ T Cell Isolation Kit | For processing 1 x 10^9 cells |
| 环形磁铁 | S0D3022 | Starter EasyIso Separator | 盒 |
| 分选Buffer | S0D3018 | Starter MagSep Separation Buffer | 250ml |
| 筛网 | abs7231 | 40um细胞筛网（300目，蓝色，底面过滤） | 50个/箱 |
| 红细胞裂解液（1×） | abs9101 | RBC Lysis Buffer | 100ml |
| 阻断FCR非特异性染色 | S0B0599 | Mouse FcR Blocking Reagent | 200T |
| 染色缓冲液 | abs9475 | Flow cytometry staining buffer | 500ml |
| 流式鉴定 | 130-118-329 | CD8a-FITC, mouse | 500T |
| 流式鉴定 | S0B5133 | PerCP-Cy5.5 Rat Anti-Mouse CD4 Antibody (GK1.5) | 50ug |
| 流式鉴定 | 561037 | APC-Cy™7 Rat Anti-Mouse CD45 | 100ug |
三、实验操作步骤
1.制备样本
取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液，进行细胞计数。
Note：推荐采用AO/PI染色后进行计数；脾细胞可采用400 g离心7 min。
2.重悬细胞
用100 μL MagSep Separation Buffer重悬1×10⁷细胞。
Note：试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测初始CD4比例。
剂量和时间：1×10⁷ cells / 100 μL
剂量和时间：1×10⁷ cells / 100 μL
3.加入抗体
加入10 μL Mouse CD4 T cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀。
Note：可用移液器轻轻吹匀2-3下。
剂量和时间：10 μL / 100 μL
剂量和时间：10 μL / 100 μL
4.孵育
Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min。
剂量和时间：室温孵育10 min
剂量和时间：室温孵育10 min
5.混匀磁珠
震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads。
剂量和时间：混匀5-30 s
剂量和时间：混匀5-30 s
6.加入磁珠
加7.5 μL Streptavidin beads至样品中。
剂量和时间：7.5 μL / 100 μL
剂量和时间：7.5 μL / 100 μL
7.磁珠与细胞孵育
轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5 min。
Note：可用移液器轻轻吹匀2-3下；若磁珠出现沉淀，可在2.5 min时轻弹混匀。
剂量和时间：室温孵育5 min
Note：可用移液器轻轻吹匀2-3下；若磁珠出现沉淀，可在2.5 min时轻弹混匀。
剂量和时间：室温孵育5 min
8.加入缓冲液
加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉淀。
剂量和时间：总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）；总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）
剂量和时间：总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）；总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）
9.磁力架吸附
样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上。
剂量和时间：单孔磁力架吸附：3 min；联排磁力架吸附：5 min
剂量和时间：单孔磁力架吸附：3 min；联排磁力架吸附：5 min
10.收集样品
倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品。
Note：分选的细胞可采用400 g离心7 min，用于后续培养和分析。
剂量和时间：细胞分选成功
Note：分选的细胞可采用400 g离心7 min，用于后续培养和分析。
剂量和时间：细胞分选成功
重要提示（Notes）
体积推荐：
0.1-1 × 10⁸ cells（0.1-1 mL）推荐使用5 mL单孔磁极（Starter EasyIso Separator），吸附总体积为2.5 mL
2-5 × 10⁸ cells（2-5 mL）推荐使用15 mL联排磁极（Starter EasyEights EasyIso Separator），吸附总体积为7.5 mL
死细胞处理：
若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒（Dead Cell Removal Set, RUO #S0K0009）。
体积推荐：
0.1-1 × 10⁸ cells（0.1-1 mL）推荐使用5 mL单孔磁极（Starter EasyIso Separator），吸附总体积为2.5 mL
2-5 × 10⁸ cells（2-5 mL）推荐使用15 mL联排磁极（Starter EasyEights EasyIso Separator），吸附总体积为7.5 mL
死细胞处理：
若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒（Dead Cell Removal Set, RUO #S0K0009）。
四、样本制备分选前细胞计数
CD4分选对比
分选前CD4数据：
CD8分选对比
分选前CD8数据：
分选后CD8数据：
产品信息
本文由斯达特技术专家团审核发布
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