小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

中性粒细胞(Neutrophils)是机体抗感染免疫的第一道防线,同时在肿瘤微环境、组织修复及自身免疫性疾病中发挥关键调控作用。在小鼠模型研究中,Ly-6G(淋巴细胞抗原6G) 是目前公认的中性粒细胞核心表面标志物。

中性粒细胞机体抗感染免疫肿瘤微环境
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小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析
一、背景概述

中性粒细胞(Neutrophils)是机体抗感染免疫的第一道防线,同时在肿瘤微环境、组织修复及自身免疫性疾病中发挥关键调控作用。在小鼠模型研究中,Ly-6G(淋巴细胞抗原6G)是目前公认的中性粒细胞核心表面标志物。

Ly-6G 属于 Ly-6 超家族的 GPI 锚定蛋白,分子量约为 21-25 kDa,在成熟中性粒细胞上高度特异性表达。它不仅是中性粒细胞研究的"分子标签",更是体内功能学研究中抗体介导清除策略的理想靶点。

二、体内中性粒细胞清除的实验思路设计
项目 具体内容
样本来源 正常小鼠 & IMR32荷瘤SCID鼠
干预处理 使用抗体/对照清除体内中性粒细胞,观察功能变化
实验组:鼠源化抗-Ly6G(克隆1A8,小鼠IgG2a),设置剂量梯度(25 μg、50 μg、100 μg)。
阳性对照组:传统大鼠抗-Ly6G(Rat IgG2a,Bio X Cell),剂量50 μg或100 μg。
阴性对照组:PBS(溶剂对照)
在IMR32荷瘤SCID鼠中,给予IgA ch14.18抗体 + SIRPα-D1融合蛋白(用于人为招募中性粒细胞入瘤),同时给予鼠源化抗-Ly6G观察能否清除瘤内已聚集的细胞
检测方法 血液样本:通过面颊穿刺采血,收集于肝素锂管中,立即置于冰上(防止CD115(CSF1R)内化,确保单核细胞门控准确)。
肿瘤组织样本(IMR32荷瘤模型):第70天处死后切除肿瘤,剪碎,使用小鼠肿瘤解离试剂盒进行标准化酶解消化,过70 μm细胞筛获得单细胞悬液。
流式分型检测+绝对计数
实验目的 将大鼠源抗-Ly6G(IgG2a,仅能激活Fc依赖的缓慢清除)进行鼠源化改造为小鼠IgG2a同型。小鼠IgG2a是唯一能同时高亲和力结合所有活化性Fcγ受体(FcγRI/IV)并高效结合C1q(激活补体CDC)的同型,应能实现"三通路齐发"(ADCC+ADCP+CDC),达到高效、持久、单药单用的清除效果
三、结果说明
四、特殊注意事项

为确保流式检测结果的准确性和可靠性,实验中需特别注意以下关键点:

1. 避免抗-Ly6G 表位封闭(masking)带来的假阴性
建议使用 CD45 做淋巴细胞圈门,排除 Siglec-F⁺(嗜酸性粒细胞)和 CD115⁺(单核细胞),用 Gr-1(RB6-8C5)⁺ / CD11b⁺ 圈门中性粒细胞。

2. 绝对计数
加入已知数量的微球乳胶珠(microsphere latex beads),计算"每5000个微球对应的中性粒细胞数量",实现标准化绝对定量。

3. 死活排除
肿瘤样本中加入 TO-PRO-3 染料排除死细胞,确保流式数据反映真实活细胞群体。

五、做了哪些平行比较

为全面验证鼠源化抗-Ly6G 抗体的清除效能,我们设置了多维度平行比较:

比较维度 具体内容
不同抗体的直接头对头比较 鼠源化抗-Ly6G(25/100 μg) vs. 传统大鼠抗-Ly6G(50 μg) vs. PBS,均在同一老龄 C57BL/6J(>20周,最抵抗品系)中进行
不同剂量的纵向比较 25 μg(低) vs. 100 μg(高)的鼠源化抗体,观察清除持续时间差异(短效1周 vs. 长效4周)
不同小鼠品系的普适性验证 C57BL/6J vs. Balb/c vs. NXG(T/B/NK缺、补体C5缺陷) vs. SCID(T/B缺)
不同解剖位置的清除效率 外周血(循环池) vs. IMR32肿瘤微环境(组织浸润池),确认即使被招募到肿瘤内的中性粒细胞也能被彻底清除
六、斯达特产品推荐
功能性抗体 & 辅助产品
产品分类 产品编号 名称 规格
功能性抗体 S0B1198 Invivo Anti-mouse Ly6G monoclonal Antibody 1/5/25/50/100 mg
功能性抗体 BE0075 InVivoMAb anti-mouse Ly6G 1/5/25/50/100 mg
同型对照 S0B0787 Invivo mouse IgG2a isotype control 1/5/25/50/100 mg
同型对照 BE0089 InVivoMAb rat IgG2a isotype control, anti-trinitrophenol 1/5/25/50/100 mg
组织消化解离 abs50090 Mouse tumor tissue dissociation kit. 10T/25T/50T
筛网 abs7232 70μm细胞筛网(200目,白色,底面过滤) 50个/箱
流式鉴定:Panel 1 Myeloid Panel
靶点 荧光素 产品编号 名称 规格
CD11b FITC S0B1808 FITC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70) 25T/50T/100T
Ly-6C PerCP-Cy5.5 S0B1812 PerCP-Cy5.5 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4) 25T/50T/100T
Ly-6G PE-Cy7 S0B5247 PE-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly6G Antibody (1A8) 25T/50T/100T
Siglec-F (CD170) BV421 562681 BD Horizon™ BV421 Rat Anti-Mouse Siglec-F 25µg/50µg
CD45 BV510 563891 BD Horizon™ BV510 Rat Anti-Mouse CD45 25µg/50µg
流式鉴定:Panel 2 Monocyte Panel
靶点 荧光素 产品编号 名称 规格
CD11b FITC S0B1808 FITC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70) 25T/50T/100T
GR-1 PE-Cy7 S0B8293 PE-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antibody (RB6-8C5) 25T/50T/100T
CD115 APC S0B8572 APC Rat Anti-Mouse CD115 Antibody (AFS98) 25T/50T/100T
Ly-6C APC-Cy7 S0B5909 APC-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4) 25T/50T/100T
Siglec-F (CD170) BV421 562681 BD Horizon™ BV421 Rat Anti-Mouse Siglec-F 25µg/50µg
CD45 BV510 563891 BD Horizon™ BV510 Rat Anti-Mouse CD45 25µg/50µg
流式鉴定:Panel 3 Lineage Panel
靶点 荧光素 产品编号 名称 规格
CD3ε PE S0B1697 PE Rat Anti-Mouse CD3 Antibody (17A2) 25T/50T/100T
NK1.1 PerCP-Cy5.5 S0B8101 PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Mouse NK1.1 Antibody (PK136) 25T/50T/100T
B220/CD45R PE-Cy7 S0B5262 PE-Cy7 Rat Anti-Mouse CD45R/B220 Antibody (RA3-6B2) 25T/50T/100T
CD11b APC S0B5527 APC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70) 25T/50T/100T
Ly-6C APC-Cy7 S0B5909 APC-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4) 25T/50T/100T
CD45 Pacific Blue S0B1655 Pacific Blue Rat Anti-Mouse CD45 Antibody (30-F11) 25T/50T/100T
GR-1 Pacific Orange RM3030 Ly-6G/Ly-6C Monoclonal Antibody (RB6-8C5), Pacific Orange™ 1mL
七、总结

本技术方案系统性地展示了基于 Ly-6G 靶点的小鼠中性粒细胞体内清除实验的完整设计路径——从抗体工程改造(大鼠源 → 鼠源化 IgG2a)、多维度平行比较验证,到精细化的流式检测策略与配套产品矩阵。鼠源化抗-Ly6G 抗体通过 ADCC + ADCP + CDC 三重机制协同作用,实现了高效、持久的中性粒细胞清除,为肿瘤免疫、感染模型及自身免疫疾病研究提供了可靠的工具。

斯达特生物提供从功能性抗体、同型对照、组织解离试剂到多色流式 Panel 的一站式产品支持,助力您在免疫学研究中获得稳健、可重复的实验数据。

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