小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析
中性粒细胞(Neutrophils)是机体抗感染免疫的第一道防线,同时在肿瘤微环境、组织修复及自身免疫性疾病中发挥关键调控作用。在小鼠模型研究中,Ly-6G(淋巴细胞抗原6G) 是目前公认的中性粒细胞核心表面标志物。

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中性粒细胞(Neutrophils)是机体抗感染免疫的第一道防线,同时在肿瘤微环境、组织修复及自身免疫性疾病中发挥关键调控作用。在小鼠模型研究中,Ly-6G(淋巴细胞抗原6G)是目前公认的中性粒细胞核心表面标志物。
Ly-6G 属于 Ly-6 超家族的 GPI 锚定蛋白,分子量约为 21-25 kDa,在成熟中性粒细胞上高度特异性表达。它不仅是中性粒细胞研究的"分子标签",更是体内功能学研究中抗体介导清除策略的理想靶点。

| 项目 | 具体内容 |
|---|---|
| 样本来源 | 正常小鼠 & IMR32荷瘤SCID鼠 |
| 干预处理 | 使用抗体/对照清除体内中性粒细胞,观察功能变化 实验组:鼠源化抗-Ly6G(克隆1A8,小鼠IgG2a),设置剂量梯度(25 μg、50 μg、100 μg)。 阳性对照组:传统大鼠抗-Ly6G(Rat IgG2a,Bio X Cell),剂量50 μg或100 μg。 阴性对照组:PBS(溶剂对照) 在IMR32荷瘤SCID鼠中,给予IgA ch14.18抗体 + SIRPα-D1融合蛋白(用于人为招募中性粒细胞入瘤),同时给予鼠源化抗-Ly6G观察能否清除瘤内已聚集的细胞 |
| 检测方法 | 血液样本:通过面颊穿刺采血,收集于肝素锂管中,立即置于冰上(防止CD115(CSF1R)内化,确保单核细胞门控准确)。 肿瘤组织样本(IMR32荷瘤模型):第70天处死后切除肿瘤,剪碎,使用小鼠肿瘤解离试剂盒进行标准化酶解消化,过70 μm细胞筛获得单细胞悬液。 流式分型检测+绝对计数 |
| 实验目的 | 将大鼠源抗-Ly6G(IgG2a,仅能激活Fc依赖的缓慢清除)进行鼠源化改造为小鼠IgG2a同型。小鼠IgG2a是唯一能同时高亲和力结合所有活化性Fcγ受体(FcγRI/IV)并高效结合C1q(激活补体CDC)的同型,应能实现"三通路齐发"(ADCC+ADCP+CDC),达到高效、持久、单药单用的清除效果 |



为确保流式检测结果的准确性和可靠性,实验中需特别注意以下关键点:
1. 避免抗-Ly6G 表位封闭(masking)带来的假阴性
建议使用 CD45 做淋巴细胞圈门,排除 Siglec-F⁺(嗜酸性粒细胞)和 CD115⁺(单核细胞),用 Gr-1(RB6-8C5)⁺ / CD11b⁺ 圈门中性粒细胞。
2. 绝对计数
加入已知数量的微球乳胶珠(microsphere latex beads),计算"每5000个微球对应的中性粒细胞数量",实现标准化绝对定量。
3. 死活排除
肿瘤样本中加入 TO-PRO-3 染料排除死细胞,确保流式数据反映真实活细胞群体。
为全面验证鼠源化抗-Ly6G 抗体的清除效能,我们设置了多维度平行比较:
| 比较维度 | 具体内容 |
|---|---|
| 不同抗体的直接头对头比较 | 鼠源化抗-Ly6G(25/100 μg) vs. 传统大鼠抗-Ly6G(50 μg) vs. PBS,均在同一老龄 C57BL/6J(>20周,最抵抗品系)中进行 |
| 不同剂量的纵向比较 | 25 μg(低) vs. 100 μg(高)的鼠源化抗体,观察清除持续时间差异(短效1周 vs. 长效4周) |
| 不同小鼠品系的普适性验证 | C57BL/6J vs. Balb/c vs. NXG(T/B/NK缺、补体C5缺陷) vs. SCID(T/B缺) |
| 不同解剖位置的清除效率 | 外周血(循环池) vs. IMR32肿瘤微环境(组织浸润池),确认即使被招募到肿瘤内的中性粒细胞也能被彻底清除 |


| 产品分类 | 产品编号 | 名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 功能性抗体 | S0B1198 | Invivo Anti-mouse Ly6G monoclonal Antibody | 1/5/25/50/100 mg |
| 功能性抗体 | BE0075 | InVivoMAb anti-mouse Ly6G | 1/5/25/50/100 mg |
| 同型对照 | S0B0787 | Invivo mouse IgG2a isotype control | 1/5/25/50/100 mg |
| 同型对照 | BE0089 | InVivoMAb rat IgG2a isotype control, anti-trinitrophenol | 1/5/25/50/100 mg |
| 组织消化解离 | abs50090 | Mouse tumor tissue dissociation kit. | 10T/25T/50T |
| 筛网 | abs7232 | 70μm细胞筛网(200目,白色,底面过滤) | 50个/箱 |
| 靶点 | 荧光素 | 产品编号 | 名称 | 规格 |
|---|---|---|---|---|
| CD11b | FITC | S0B1808 | FITC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70) | 25T/50T/100T |
| Ly-6C | PerCP-Cy5.5 | S0B1812 | PerCP-Cy5.5 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4) | 25T/50T/100T |
| Ly-6G | PE-Cy7 | S0B5247 | PE-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly6G Antibody (1A8) | 25T/50T/100T |
| Siglec-F (CD170) | BV421 | 562681 | BD Horizon™ BV421 Rat Anti-Mouse Siglec-F | 25µg/50µg |
| CD45 | BV510 | 563891 | BD Horizon™ BV510 Rat Anti-Mouse CD45 | 25µg/50µg |
| 靶点 | 荧光素 | 产品编号 | 名称 | 规格 |
|---|---|---|---|---|
| CD11b | FITC | S0B1808 | FITC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70) | 25T/50T/100T |
| GR-1 | PE-Cy7 | S0B8293 | PE-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antibody (RB6-8C5) | 25T/50T/100T |
| CD115 | APC | S0B8572 | APC Rat Anti-Mouse CD115 Antibody (AFS98) | 25T/50T/100T |
| Ly-6C | APC-Cy7 | S0B5909 | APC-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4) | 25T/50T/100T |
| Siglec-F (CD170) | BV421 | 562681 | BD Horizon™ BV421 Rat Anti-Mouse Siglec-F | 25µg/50µg |
| CD45 | BV510 | 563891 | BD Horizon™ BV510 Rat Anti-Mouse CD45 | 25µg/50µg |
| 靶点 | 荧光素 | 产品编号 | 名称 | 规格 |
|---|---|---|---|---|
| CD3ε | PE | S0B1697 | PE Rat Anti-Mouse CD3 Antibody (17A2) | 25T/50T/100T |
| NK1.1 | PerCP-Cy5.5 | S0B8101 | PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Mouse NK1.1 Antibody (PK136) | 25T/50T/100T |
| B220/CD45R | PE-Cy7 | S0B5262 | PE-Cy7 Rat Anti-Mouse CD45R/B220 Antibody (RA3-6B2) | 25T/50T/100T |
| CD11b | APC | S0B5527 | APC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70) | 25T/50T/100T |
| Ly-6C | APC-Cy7 | S0B5909 | APC-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4) | 25T/50T/100T |
| CD45 | Pacific Blue | S0B1655 | Pacific Blue Rat Anti-Mouse CD45 Antibody (30-F11) | 25T/50T/100T |
| GR-1 | Pacific Orange | RM3030 | Ly-6G/Ly-6C Monoclonal Antibody (RB6-8C5), Pacific Orange™ | 1mL |
本技术方案系统性地展示了基于 Ly-6G 靶点的小鼠中性粒细胞体内清除实验的完整设计路径——从抗体工程改造(大鼠源 → 鼠源化 IgG2a)、多维度平行比较验证,到精细化的流式检测策略与配套产品矩阵。鼠源化抗-Ly6G 抗体通过 ADCC + ADCP + CDC 三重机制协同作用,实现了高效、持久的中性粒细胞清除,为肿瘤免疫、感染模型及自身免疫疾病研究提供了可靠的工具。
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