一、实验前准备-全套试剂耗材

 

 

磁珠分选-所用全套试剂耗材

 

 

无柱式磁珠分选技术全流程

二、磁珠分选步骤参考（以S0K3001为例）

1. 样本制备
提前制备完成单细胞悬液，具体步骤可参考"学术中心-单细胞样本制备解决方案-Human PBMC Separation

2. 细胞计数 & 活率测定

• 取10-20μL细胞悬液，与等体积的台盼蓝染液（0.4%）混合
• 取适量混合液（通常10μL）加入计数仪专用的一次性计数载玻片
• 将载玻片插入仪器，自动分析细胞总浓度（cells/mL）、活细胞浓度和活率百分比

3. 磁性标记

• (1) 细胞重悬：用 100 μL MagSep Separation Buffer 重悬 1×10⁷细胞，试剂可根据样品体积等比例调整，建议留存分选前样本检测初始 Human NK细胞比例。
• (2) 加入抗体：加入 10 μL Human NK cell Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀，可采用移液器轻轻吹匀 2-3 次。
• (3) 抗体孵育：将抗体与细胞充分结合，室温孵育 10 min。
• (4) 混匀磁珠：震荡 5-30 s，充分混匀 Streptavidin beads。

4. 磁性分离

• (5) 混匀磁珠：震荡 5-30 s，充分混匀 Streptavidin beads。
• (6) 加入磁珠：向样品中加入 20 μL Streptavidin beads（每 100 μL 体系）。
• (7) 磁珠孵育：轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育 5 min；孵育过程中磁珠可能沉底，可在 2.5 min 时轻弹管壁混匀一次，混匀可采用移液器轻轻吹匀 2-3 次。
• (8) 加缓冲液上磁极：加入 MagSep Separation Buffer，将总体积加至 2.5 mL（5 mL 流式管）或 7.5 mL（15 mL 离心管），立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底。
• (9) 磁力吸附：将样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；单孔磁力架吸附 3 min，联排磁力架吸附 5 min。
• (10) 收集目标细胞：倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集未被磁珠标记的细胞；分选后的细胞可采用 400 g 离心 7 min，用于后续培养和分析。

三、流式验证：分选效果金标准

 

 

取适量细胞用荧光抗体染色，上流式细胞仪检测分选纯度，这是验证分选效果的金标准。

流式结果 S0K3001 Human NK Cell Isolation Kit (Column-Free)

分选前 vs 斯达特 vs 进口品牌

四、小优有妙计 -- 新手避坑核心要点

• 0.1-1 × 10⁸ cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；
• 2-5 ×10⁸ cells（2-5mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5mL；

实验所用试剂耗材