一、实验前准备-全套试剂耗材

磁珠分选-所用全套试剂耗材

 

 

二、磁珠分选步骤参考（以小鼠脾脏为例）

 

1. 实验思路框架

样本来源	C57 Mouse
取材	Spleen
样本处理	通过研磨加裂红方式处理为单细胞悬液
分选目的细胞	①CD11B+Myloid髓系细胞 ②F4/80 MacroPhage巨噬细胞

 

 

2. 实验所用试剂耗材

 

产品分类	产品编号	名称	规格
Myloid髓系分选磁珠	S0K0007	CD11b NanoBeads, human and mouse（RUO）	1ml/2ml
巨噬细胞分选磁珠	S0K0012	Anti-F4/80 Nanobeads, mouse（RUO）	1ml/2ml
分选器/磁铁	S0D3004	Starter MagSep Separator (8S)	盒
分选柱	S0D3012	S Separation Columns	25个/盒
分选架	S0D3005	MultiStand	个
分选Buffer	S0D3018	Starter MagSep Separation Buffer	250ml
筛网	abs7232	70um细胞筛网（200目，白色，底面过滤）	50个/箱
红细胞裂解液（1×）	abs9101	RBC Lysis Buffer	100ml
阻断FCR非特异性染色	S0B0599	Mouse FcR Blocking Reagent	200T
染色缓冲液	abs9475	Flow cytometry staining buffer	500ml
流式鉴定	563168	BV711 Rat Anti-CD11b	50ug
流式鉴定	565411	BV421 Rat Anti-Mouse F4/80	50ug

 

 

3. 实验步骤

 

①分选Buffer预处理：关键步骤勿省略！

a. 开启超声仪，对分选 Buffer 进行超声去气约10min

b. 去气完成后，将Buffer预冷至 2~8℃，备用

 

②细胞计数&活率测定

a. 提前制备完成单细胞悬液

b. 取10-20μL细胞悬液，与等体积的 台盼蓝染液（4%） 混合

c. 取适量混合液（通常10μL）加入计数仪专用的一次性计数载玻片

d. 将载玻片插入仪器，自动分析细胞总浓度（cells/mL）、活细胞浓度和活率百分比

 

③分选柱润洗及磁性标记

a. 准备分选柱：选择合适的分选柱（如MS、LS、LD柱），将其置于磁性分选器上。用3 mL 缓冲液润洗柱子。

b. 细胞计数后，300×g 离心 10min，弃上清

c. 每 1×10⁷细胞加 90 μL 缓冲液重悬每 1×10⁷细胞：90μL 缓冲液重悬 + 10μL 磁珠，2~8℃孵育 15min

 

④磁性分离

a. 上样：将标记后的细胞悬液加载到分选柱上（未标记细胞）。

b. 洗涤与收集：根据实验需求分管收集

c. 阴性分选（去除非目标细胞）：目标细胞未结合磁珠，会直接流穿分选柱。收集流穿液，即为富集的目标细胞。

d. 阳性分选（直接获取目标细胞）：目标细胞结合磁珠并被吸附在柱内。

e. 缓冲液洗涤柱子 3 次，每次 3 mL，待柱内液体完全流空后再加下一次。合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上。

f. 向柱内加入 5 mL 缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞

 

⑤流式验证：分选效果金标准

• 取适量细胞用荧光抗体染色，上流式细胞仪检测分选纯度，这是验证分选效果的金标准。

 

⑥实验结果

 

a. CD11b NanoBeads, human and mouse（RUO） （Starter，S0K0007）

 

分选前，小鼠CD11b  

分选后，小鼠CD11b（S0K0007, 用量20μl）  

分选后，小鼠CD11b（S0K0007, 用量10μl）

 

b. Anti-F4/80 Nanobeads, mouse（RUO） （Starter，S0K0012）

 

分选前，小鼠F4/80

分选后，小鼠F4/80（S0K0012, 用量10μl）

分选后，小鼠F4/80（S0K0012, 用量5μl）