拯救你的选择困难症

细胞分离技术的原理与操作方法，主要可分为两大类：基于物理特性（如密度梯度离心、基于细胞大小和黏附性的方法）和基于免疫学原理（如玫瑰花结法、抗体技术）的方法。在基于抗体特异性结合的免疫学方法中，当前最主流的两种技术是磁激活细胞分选（MACS）和荧光激活细胞分选（FACS）。

基于物理特性的细胞分离方法

一、磁珠分选（MACS）

1、磁珠分选是一种广泛应用的磁分选方法。其核心系统包含三个部分：

- 微珠：超顺磁性颗粒，表面偶联特异性抗体。其微小尺寸使其不会过度占据细胞表面表位、不激活细胞，且通常无需在分选后去除。

- 层析柱：内装铁磁性微球。置于磁场中时，其磁场可增强约10,000倍，形成高梯度磁场以捕获磁性标记的细胞，同时减少对细胞的机械应力。

- 分离器：提供磁场的设备，有多种型号以匹配不同规格的层析柱和样本体积。

2、标记方法主要有两种：

直接法：微珠直接与细胞表面抗原结合。步骤最简捷，仅需一次孵育和最少洗涤。

间接法：分两步进行。先用未偶联或带有生物素/荧光标记的一抗与细胞孵育，再加入能与该一抗（如抗免疫球蛋白微珠）或其偶联分子（如抗生物素微珠）结合的MACS微珠。此法便于使用抗体混合物进行标记。

3. 磁珠分选技术主要采用四种分离策略：正向选择、耗竭法、未接触分离（亦称负向选择）以及顺序分选。

①在正向选择过程中，特定细胞类型会通过磁性标记（直接或间接方式）被保留，从而在分离过程中得以留存，而其余细胞类型则继续流动通过。随后，在柱体经洗涤并脱离磁场后，目标细胞可被洗脱。采用该策略是分离特定细胞类型的最快方法。

②在耗竭策略中，非目标细胞经磁性标记后，当悬浮液通过磁场时，目标细胞会随流体通过收集，而非目标细胞则滞留于层析柱中并最终被弃用。

③未接触式分离法是获取目标细胞类型而不需标记（未接触形式）的最佳策略。在此方法中，非目标细胞类型会被磁性标记并滞留于层析柱中，从而被去除。由于目标细胞未被标记，它们将通过流动相被收集。若需要，亦可在标记组分从磁场中分离后进行洗脱。

④顺序分选，合上述多种策略，进行连续两轮或以上的分选。

采用MACS技术通过耗竭法分离细胞后进行阳性选择。表达与目标细胞相同标记物的非目标细胞被标记并进行耗竭处理。随后对流式分离中获得的目标细胞进行共同标记物标记，并通过阳性选择法进行分离。

采用MACS技术通过两次连续阳性选择实现细胞分离。首先，对细胞进行第一种标记物标记并通过阳性选择收集；随后通过酶法去除标记物，以便对目标细胞进行第二种标记物的二次标记，该标记物同样通过阳性选择收集。

二、FACS（流式分选）工作流程与特点

流式细胞仪将细胞悬液注入流动室，在鞘液包裹下形成单细胞流。激光照射单个细胞，仪器检测其产生的光散射信号和荧光发射信号，该技术可用于分选多种细胞类型，其中造血细胞的分离是其最常见应用之一。

数据分析与分选：检测到的信号经处理后，以散点图等形式显示。操作者可在屏幕上设定参数（如特定荧光强度或大小），圈定需要分选的特定细胞群。仪器随后对符合参数的细胞液滴充电，使其在电场中偏转，从而实现收集。

三、MACS和FACS区别

相关试剂及产品清单