UniOne^® TR-FRET Human CDK2/CRBN PROTAC Binding Kit

价格￥4,380.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA086128

规格

100T500T2500T10000T

数量

产品介绍

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背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定分子胶 CDK2 Degrader7及待检测化合物介导的 CRBN（DDB1/CRBN 复合体）与CDK2( CDK2/Cyclin E1复合体)相互作用。该方法是实现简单快速地检测能够介导 DDB1/CRBN 复合体与 CDK2相互作用的小分子的高通量形式。
如下图所示，CRBN 和 CDK2之间的相互作用是通过使用Eu标记的抗Tag1抗体（TR-FRET 供体）和 Ac 标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于分子胶CDK2 Degrader7介导了 CRBN 与 CDK2 的相互作用，供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与CDK2 Degrader7 和CRBN、 CDK2的相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤。

产品规格

产品组分

产品组分及储存条件】

组分	浓度	100T	500T	2500T	10000T	储存温度
Tag1-CRBN protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Tag2-CDK2 protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
CDK2 Degrader 7	1mM	5μL	5μL	25μL	100μL	-80℃
Anti-Tag1 Eu antibody	50×	5μL	50μL	250μL	1mL	-80℃
Anti-Tag2 Ac antibody	100×	5μL	25μL	125μL	500μL	-80℃
Detection buffer	10×	400μL	2mL	10mL	40mL	-80℃

注意：所有首次解冻后立即分装，并按建议储存温度保存，避免稀释后储存及反复冻融。

操作步骤

1、试剂准备

1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

表1. 试剂配制

试剂名称	配置	每个检测孔用量μL
Detection buffer	取2mL 10 × Detection buffer1加入18mL去离子水，稀释至1×，混匀备用。	-
CDK2 Degrader7	按照反应体系，化合物用1×Detection buffer稀释到待测浓度。	2
Tag1-CRBN protein	取20μL Tag1-CRBN protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2-CDK2 protein	取20μL Tag2-CDK2 protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Antibody Mix	取50μL Anti-Tag1 Eu antibody 原液，加入 1×Detection buffer 2.450mL, 混匀；取25μL Anti-Tag2 Ac antibody 原液，加入 1× Detection buffer 2.475mL, 混匀；二者1:1混合为Antibody Mix。	10

1.2 待测样品梯度稀释

以CDK2 Degrader7为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰的影响，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表2. CDK2 Degrader7梯度稀释（根据实际情况调整）

	CDK2 Degrader7 终浓度（nM）	CDK2 Degrader7配制浓度（nM）	配置方法
①	1000	10000	1μL 1mM CDK2 Degrader7 +99μL 1× Detection buffer
②	333.3333	3333.333	20μL ① +40μL 1× Detection buffer
③	111.1111	1111.111	20μL ② +40μL 1× Detection buffer
④	37.0370	370.370	20μL ③ +40μL 1× Detection buffer
⑤	12.3457	123.457	20μL ④ +40μL 1× Detection buffer
⑥	4.1152	41.152	20μL ⑤ +40μL 1× Detection buffer
⑦	1.3717	13.717	20μL ⑥ +40μL 1× Detection buffer
⑧	0.4572	4.572	20μL ⑦+40μL 1× Detection buffer
⑨	0.1524	1.524	20μL ⑧+40μL 1× Detection buffer
Blank	0	0	40μL 1× Detection buffer

2、加样及对照

阳性药标曲	待测样本	空白对照孔	NC
2μL 梯度稀释CDK2 Degrader7	2μL 梯度稀释待测样本	2μL 1× Detection buffer	10μL 1× Detection buffer 加10μL Antibody Mix
4μL Tag1-CRBN protein
4μL Tag2-CDK2 protein
10μL Antibody Mix
用封板膜封住板孔，室温孵育2小时；