UniOne^® TR-FRET Human TSLP/TSLPR Binding Kit

价格￥4,380.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA086125

规格

100T500T2500T10000T

数量

产品介绍评论(0)

背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定 TSLP与 TSLPR之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。
图所示，TSLP与 TSLPR之间的相互作用是通过使用 Eu 标记的抗 Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Ac 标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于TSLP与 TSLPR结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。Bosakitug阳性药可阻断TSLP与 TSLPR的结合，使FRET信号无法产生，所筛选药物对 TSLP与 TSLPR阻断效果越强，信号越低。该特定信号与TSLP与 TSLPR 相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

产品规格

产品组分

组分	浓度	100T	500T	2500T	10000T	储存温度
Tag1-TSLP protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Tag2- TSLPR protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Anti-Tag1 Eu antibody	50×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80℃
Anti-Tag2 Ac antibody	12.5×	40μL	200μL	1000μL	4000μL	-80℃
Detection buffer	10×	400μL	2mL	10mL	40mL	-80℃

操作步骤

1、试剂准备

1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

表1. 试剂配制

试剂名称	配置	每个检测孔用量μL
Detection buffer	取2mL 10 × Detection buffer加入18mL去离子水，稀释至1×，混匀备用。	-
Tag1- TSLP protein	取20μL Tag1- TSLP protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2- TSLPR protein	取20μL Tag2- TSLPR protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Mix	取50μL Anti-Tag1 Eu antibody 原液，加入 1×Detection buffer 2.45mL, 混匀备用; 取200μL Anti-Tag2 Ac antibody 原液，加入 1× Detection buffer 2.3mL, 混匀备用; Anti-Tag1 Eu antibody和Anti-Tag2 Ac antibody分别稀释后1:1混匀备用。	10

1.2 待测样品梯度稀释

以Bosakitug为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰的影响，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表2. 阳性药Bosakitug梯度稀释（根据实际情况调整）

	Bosakitug终浓度nM	Bosakitug配置浓度nM	配置方法
①	1000	10000	3μL 57.5μM Bosakitug+14.4μL 1× Detection buffer
②	333.333	3333.333	5μL ① +10μL 1× Detection buffer
③	111.111	1111.111	5μL ② +10μL 1× Detection buffer
④	37.037	370.370	5μL ③ +10μL 1× Detection buffer
⑤	12.346	123.457	5μL ④ +10μL 1× Detection buffer
⑥	4.115	41.152	5μL ⑤ +10μL 1× Detection buffer
⑦	1.372	13.717	5μL ⑥ +10μL 1× Detection buffer
⑧	0.457	4.572	5μL ⑦ +10μL 1× Detection buffer
⑨	0.152	1.524	5μL ⑧ +10μL 1× Detection buffer
⑩	0.051	0.508	5μL ⑨ +10μL 1× Detection buffer
⑪	0.017	0.169	5μL ⑩ +10μL 1× Detection buffer
Blank	0	0	15μL 1× Detection buffer

2、加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：2μL测待样品，4μL Tag1-TSLP protein工作液，4μL Tag2- TSLPR protein工作液，10μL混匀的Mix，依次加入384浅孔板中；

2.2 最大值对照： 2μL 1× Detection buffer稀释液，Tag1-TSLP protein工作液，4μL Tag2- TSLPR protein工作液，10μL混匀的Mix，依次加入384浅孔板中；

2.3 质控孔(NC)：10μL 1×Detection buffer加10μL Mix。

所有样本加完后，离心，盖封板膜，室温孵育2小时。