UniOne^® TR-FRET Human VCB（VHL Complex）Binding Kit

价格￥13,080.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA086119

规格

500T100T2500T10000T

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产品介绍

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背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定Human VCB（VHL/Elongin-C/Elongin-B Complex）与Human HIF-1α之间的相互作用，Tag2-Tracer为带荧光标签的HIF-1α多肽片段。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。
如图所示， VCB与Tracer之间的相互作用是通过使用Eu标记的抗Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Acceptor标记的SA（TR-FRET受体）检测的。由于 VCB与Tracer结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。VH032可阻断VCB与Tracer的结合，使FRET信号无法产生，所筛选药物对VCB与Tracer阻断效果越强，信号越低。信号与VCB与Tracer相互作用的程度成正比。无需洗涤步骤。

产品规格

产品组分

组分	浓度	100T	500T	2500T	10000T	储存温度
Tag1-VCB protein	100 ×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Tag2-Tracer	100 ×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Eu-anti-Tag1	50 ×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80℃
SA-Ac	100 ×	5μL	25μL	125μL	500μL	-80℃
Detection buffer	1 ×	3mL	14mL	70mL	240mL	-80℃

操作步骤

1、试剂准备

1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

表1. 试剂配制

试剂名称	配置	每个检测孔用量μL
Tag1-VCB protein	取20μL 100 × Tag1-VCB protein原液，加入到1.98mL 1×Detection buffer稀释至1×，混匀备用。	4μL
Tag2-Tracer	取20μL 100 × Tag2-Tracer原液，加入到1.98mL 1×Detection buffer稀释至1×，混匀备用。	4μL
检测试剂Mix	取50μL 50× Eu-anti-Tag1原液，加入2.45mL 1×Detection buffer稀释至2.5mL，混匀；取25μL 100× SA-Ac 原液，加入1×Detection buffer 2.475mL稀释至2.5mL，混匀；二者1:1混匀，即为检测Mix.	10μL

1.2 待测样品梯度稀释

以VH032为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰的影响，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表2. 阳性药VH032梯度稀释（根据实际情况调整）

2、加样及对照

2.1 样本孔（Sample）：2μL待测样本（梯度稀释），4μL Tag1-VCB protein工作液，4μL Tag2-Tracer工作液， 10μL检测试剂Mix，依次加入384浅孔板中。

2.2 最大信号对照：2μL Detection buffer，4μL Tag1-VCB protein工作液，4μL Tag2-Tracer工作液， 10μL检测试剂Mix，依次加入384浅孔板中。

2.3 阴性对照（Negative control）： 10μL Detection buffer, 10μL检测试剂Mix，依次加入384浅孔板中。

所有样本加完后，离心，盖封板膜，室温孵育2小时。