产品中心 HICA均相化学发光 抗体筛选&定量

Mouse Total IgG Detection Kit [Wide Range] (HICA)

价格 9,000.00 1-2周
货号 UA086082
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背景介绍
  • 本试剂盒用于定量检测缓冲液、细胞培养上清或血清样本中的小鼠免疫球蛋白G(mIgG)浓度。

    小鼠免疫球蛋白G(mIgG)由两条重链和两条轻链构成,根据重链恒定区的差异,可划分为IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3四个主要亚类。

    不同IgG亚类在结构和功能上各具特点,因此在抗原识别、补体激活以及与细胞表面Fc受体结合等免疫过程中发挥不同作用。其中,IgG2a和IgG2b通常具有较强的补体激活能力,并能有效介导ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用)和吞噬作用;IgG1虽补体激活能力相对较弱,但主要通过Fc受体发挥调理作用;IgG3的功能研究相对较少,但已知其在对某些多糖抗原的免疫应答中起关键作用。阐明小鼠不同IgG亚类的功能差异,对于深入理解免疫应答机制、构建相关疾病模型以及评估治疗性抗体的体内效应具有重要意义。

    本试剂盒采用均相发光法竞争模式进行mIgG浓度的检测。均相发光法是基于供受体微球近距离传递能量发光的均相免疫分析方法。

    它采用受体微球交联抗mIgG抗体(R1),生物素标记 mIgG(R2),供体微球交联链霉亲和素(R3)进行小鼠总IgG的浓度测定。

    当待测样品中不含mIgG时,R2、R1与待测物混合后,生物素标记mIgG同受体微球结合成免疫复合物,再同加入的R3的供体微球结合形成发光复合物,此时两种微球的间距小于200nm, 经激发光照射后,供体微球产生单线态氧并扩散至受体微球,受体微球接受能量后产生相应的发射光。

    反之,当待测样品中含有mIgG时,待测样品中的mIgG会与R2竞争性的结合R1形成免疫复合物,加入R3后,形成供受体微球的发光复合物减少,经激光照射后,受体微球产生的光信号会出现相应的下降。

    通过仪器感光元件收集光信号,采用校准品拟合标准曲线可计算得到待测物中mIgG的浓度。

产品规格
  • 储存条件

    2~8℃ 避光储存12个月;
    校准品复溶后可分装保存于-20℃,避免反复冻融。

产品组分
  • 名称

    主要活性成份

    含量

    mIgG检测试剂R1

    抗小鼠IgG抗体交联的受体微球

    2mL/瓶×1

    mIgG检测试剂R2

    生物素标记的小鼠IgG

    2mL/瓶×1

    mIgG检测试剂R3

    链霉亲和素交联的供体微球

    5mL/瓶×1

    mIgG校准品

    小鼠IgG

    100μg,冻干品

    mIgG校准品缓冲液

    BSA

    2mL/瓶×1


操作步骤
  • 必需但本产品未提供的材料及仪器:

    发光板/条

    含Alpha模块的多功能酶标仪

    【样品要求】

    细胞上清液需1000 ×g离心10分钟,去除颗粒和聚合物。

    若待测样本浓度超出检测上限,建议稀释后检测。

    【检测流程供参考】

    检测流程

    检测流程(37℃)

    检测流程(室温)

    第一步:

    2μL 校准品/样品 + 4μLR2*+ 4μLR1+ 10μLR3,避光/绿光

    2μL 校准品/样品 + 4μLR2*+ 4μLR1+ 10μLR3,避光/绿光

    第二步:

    37℃孵育30分钟,避光/绿光

    室温孵育60分钟,避光/绿光

    读数

    仪器读数

    仪器读数


    * 本kit为竞争法检测,检测试剂R2会与R1直接反应,两者不可提前预混加样,并且注意加样顺序,严格按照流程操作!

    【校准品梯度样品配制】

    使用与待测样本相同的基质来复溶、配制校准品梯度样本。比如,测试样本为细胞培养上清时,应选择未培养过细胞的培养基来复溶、配制校准品梯度样本。

    采用100μL基质复溶冻干校准品,然后用基质对mIgG校准品进行稀释,推荐稀释方案如下表:

    梯度

    浓度(μg/mL)

    mIgG高浓度

    基质(μL)

    C8

    1000

    /

    /

    C7

    300

    21μL C8

    49

    C6

    100

    7μL C8

    63

    C5

    30

    7μL C7

    63

    C4

    10

    7μL C6

    63

    C3

    3

    7μL C5

    63

    C2

    1

    7μL C4

    63

    C1

    0

    63


    完整标准曲线示例:

    【性能参数】

    空白限:重复检测20次校准品C1,计算信号均值及SD,用标准曲线计算 信号均值-2×SD对应的浓度值,即为空白限。

    检测流程

    基质

    空白限(μg/mL)

    检测流程1

    校准品缓冲液

    0.74

    检测流程2

    校准品缓冲液

    0.64


    动态范围:0~1000μg/mL。

    重复性:高低浓度样品重复测试10次,计算浓度CV。

    检测流程

    基质

    重复性

    低浓度

    高浓度

    检测流程1

    校准品缓冲液

    2.31%

    2.71%

    检测流程2

    校准品缓冲液

    4.88%

    2.23%


    准确度:测试准确度样本,计算与靶值的偏差。

    检测流程

    基质

    偏差

    低浓度

    高浓度

    检测流程1

    校准品缓冲液

    6.85%

    8.25%

    检测流程2

    校准品缓冲液

    -7.77%

    -9.03%


    特异性:采用校准品缓冲液稀释下列各交叉反物至100μg/mL,测试交叉干扰率。

    检测流程

    交叉物

    交叉反应率

    检测流程1

    人IgG

    8.20%

    兔IgG

    0.16%

    猪IgG

    0.23%


注意事项
  • 检测试剂R3对光敏感,使用过程中注意避光,建议在绿光下加样及孵育(光照度< 100LUX)。

    推荐每次检测重新定标,标准品各浓度点做2~3孔测试。

    推荐使用四参数(权重1/Y²)或三次样条进行拟合计算。

    注意孵育温度和孵育时间的要求。

    37℃孵育建议在HiLA均相发光仪中进行。

    不同批号试剂盒之间组分不宜混用。

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