UniOne^® TR-FRET Human PCSK9/LDLR Assay Kit

价格￥13,080.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA086058

规格

500T100T2500T10000T

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背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定Human PCSK9与Human LDLR 之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。
如图所示，PCSK9与LDLR之间的相互作用是通过使用Eu标记的抗Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Ac标记的Tag2抗体（TR-FRET受体）进行检测。由于PCSK9与LDLR结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。所筛选药物，如Pep 2-8阻断PCSK9与LDLR的结合，使FRET信号无法产生，所筛选药物对PCSK9和LDLR阻断效果越强，信号越低。信号与PCSK9与LDLR相互作用的程度成正比。无需洗涤步骤。

产品规格

产品组分

组分	浓度	100T	500T	2500T	10000T	储存温度
Tag1-LDLR protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Tag2-PCSK9 protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Anti-Tag1 Eu antibody	50×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80℃
Anti-Tag2 Ac antibody	12.5×	40μL	200μL	1mL	4mL	-80℃
Detection buffer	1×	2mL	14mL	60mL	240mL	-80℃

操作步骤

1、试剂准备

1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

表1. 试剂配制

试剂名称	配置	每个检测孔用量μL
待测样品稀释	使用稀释至1×的检测缓冲液进行待测样品的配制。若样品的储液为DMSO，建议保持体系中DMSO 含量一致，且最高不超过2%。	2
Tag1-LDLR protein	取20μL Tag1-LDLR protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL, 混匀备用。	4
Tag2-PCSK9 protein	取20μL Tag2-PCSK9 protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL, 混匀备用。	4
Antibody Mix	取50μL Anti-Tag1 Eu antibody 原液，加入 1×Detection buffer 2.45mL, 混匀；取200μL Anti-Tag2 Ac antibody 原液，加入 1× Detection buffer 2.3mL, 混匀；Anti-Tag1 Eu antibody与Anti-Tag2 Ac antibody 1:1体积混合，得到Antibody Mix。	10

1.2 待测样品梯度稀释

以Pep 2-8为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰的影响，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表2. Pep 2-8配置表（根据实际情况调整）

2、加样及对照

2.1 待测样本：2μL 梯度稀释待测样本，4μL Tag2-PCSK9 protein, 4μL Tag1-LDLR protein工作液，10μL Antibody Mix，依次加入384浅孔板中。

2.2 空白对照孔（Blank）：2μL 1× Detection buffer代替待测样本；

2.3 Eu对照孔（NC）：10μL 1× Detection buffer加10μL Antibody Mix。

所有样本加完后，离心，盖封板膜，室温孵育2小时。

	待测样本	空白对照孔（Blak）	Eu对照孔（NC）
第一步	2μL 梯度稀释待测样本	2μL 1× Detection buffer	10μL 1× Detection buffer +10μL Antibody Mix
	4μL Tag2-PCSK9 protein
	封板，1000rpm，离心1min混匀，室温孵育10min
第二步	4μL Tag1-LDLR protein
	10μL Antibody Mix
	封板，1000rpm，离心1min混匀，室温孵育120min，读板