Human IL-5 Kit (HICA)

一、样品要求
1. 为去除样本中的杂质，样本在检测前需离心（1000 ×g，10分钟）。
2. 检测血清样本中目标蛋白时，标准品应使用本底值低于检测下限的阴性血清进行稀释，并依此建立标准曲线来计算实际浓度。
3. 若样本测得浓度超过标准曲线最高值，需适当稀释后重新检测，以确保结果落在有效测量范围内。

二、检测流程

2.1 标准品梯度样品配制 采用50μL去离子水复溶冻干标准品，然后用标准品缓冲液标准品进行稀释，推荐稀释方案如下表：

2.2 检测流程：

注意：

* 测试前，将R1A、R1F与R2按照体积比1:1:1进行预混，即用即混。

**若检测RPMI样本，可另加RPMI增强液，按每50μL R3与100μL RPMI增强液预混后加入，能显著提升试剂性能。

三、性能测试

3.1 完整标准曲线示例：

3.2 性能参数验证：以下标注 * 的数据均为添加RPMI增强液的结果。

LOD：重复检测20次标准品C1，计算信号均值及SD，用标准曲线计算信号均值+2×SD对应的浓度值，即为最低检测限LOD。

•检测范围：0~100000 pg/mL。

•定量范围：0.15~10000 pg/mL。

精密度（Precision）：
板内精密度（Intra-Precision）：在同一次实验的孔板上，用已知低、中、高三种浓度的样本各重复检测10次，以评估该检测的板内精密度。标准品与样本均用不同流程检测。各浓度样本检测结果的变异系数（%CV）均低于10%，表明该方法在同一批次检测中具有良好的重现性。

板间精密度（Inter-Precision）：在5次独立实验中分别对已知低、中、高三种浓度的样本进行检测。标准品和样本均采用检测流程1检测并设置5次重复。各浓度样本的检测结果均呈现较低的变异系数（%CV＜10%），表明该方法在不同批次检测间具有良好的重现性。

准确度（Recovery）：

高浓度与低浓度质控品按1:9混合后测试其回收率，均在80%-120% ，表明该方法具有良好的准确度。

特异性：采用标准品缓冲液稀释下列蛋白至0.3μg/mL，测试交叉干扰率。

•溯源：测试标准物质NIBSC 90/586，1IU/mL≈130pg/mL。