产品中心 HICA均相化学发光细胞因子检测

Human IL-2R Kit (HICA)

Datasheet COA

价格￥9,590.00 （ 1-2周）

货号 UA086036

规格

500T2000T10000T

数量

产品介绍

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背景介绍

检验原理：
本试剂盒采用双抗体夹心的均相化学发光法（Homogeneous Immuno Chemiluminescence Assay, HICA）进行细胞因子浓度的检测，操作简单，无需洗涤。
检测体系中包含两种微球：受体微球偶联针对目标蛋白的抗体1，供体微球偶联链霉亲和素，同时使用生物素标记的抗体2。反应时，目标蛋白与抗体及微球结合形成免疫复合物，使两种微球相互靠近。当供体微球与受体微球间距小于200 nm时，受光激发后产生的单线态氧可转移至受体微球并引发化学发光；反之，若无目标蛋白存在，微球间距过大，则无信号产生。
通过检测化学发光信号强度，即可实现对目标蛋白的定量分析。该方法具有操作简便、反应快速、灵敏度高等特点。

产品规格

储存条件

2~8℃ 避光储存18个月；标准品复溶后可分装保存于-20℃，避免反复冻融。

产品组分

名称	规格	组分规格
检测试剂R1A	500T	1mL/瓶×1
	2000T	4ml/瓶×1
	10000T	20ml/瓶×1
检测试剂R1F	500T	1mL/瓶×1
	2000T	4ml/瓶×1
	10000T	20ml/瓶×1
检测试剂R2	500T	1mL/瓶×1
	2000T	4ml/瓶×1
	10000T	20ml/瓶×1
检测试剂R3	500T	6mL/瓶×1
	2000T	24ml/瓶×1
	10000T	120ml/瓶×1
标准品	500T	0.05μg冻干品×1
	2000T	0.05μg冻干品×2
	10000T	0.05μg冻干品×5
标准品缓冲液	500T	6mL/瓶×1
	2000T	12ml/瓶×1
	10000T	30ml/瓶×1

注：所使用板子推荐使用微孔板（384或96孔板，白色，浅孔）

操作步骤

一、样品要求
1. 为去除样本中的杂质，样本在检测前需离心（1000 ×g，10分钟）。
2. 检测血清样本中目标蛋白时，标准品应使用本底值低于检测下限的阴性血清进行稀释，并依此建立标准曲线来计算实际浓度。
3. 若样本测得浓度超过标准曲线最高值，需适当稀释后重新检测，以确保结果落在有效测量范围内。

二、检测流程

2.1 标准品梯度样品配制采用50μL去离子水复溶冻干标准品，然后用标准品缓冲液标准品进行稀释，推荐稀释方案如下表：

梯度	浓度（pg/mL）	标准品(μL)	稀释液(μL)
C12	100000	20μL校准品	180
C11	30000	60μL C12	140
C10	10000	60μL C11	120
C9	3000	60μL C10	140
C8	1000	60μL C9	120
C7	300	60μL C8	140
C6	100	60μL C7	120
C5	30	60μL C6	140
C4	10	60μL C5	120
C3	3	60μL C4	140
C2	1	60μL C3	120
C1	0	—	120

2.2 检测流程：流程1和检测流程2适用于绝大部分检测，检测流程3适用于RPMI培养基等含Biotin样本的检测。

检测流程	检测流程1 (37℃快速检测)	检测流程2 (室温检测)	检测流程3 (适用于含Biotin的基质)
第一步：	取2µL样品，加入6µL预混的R1A+R1F+R2*	取2µL样品，加入6µL预混的R1A+R1F+R2*	先将R1F、R2、R3按1:1:1比例混匀，静置30分钟；取3µL样品，加入13µL预混试剂，避光/绿光
孵育	400r/min震荡混匀1min，37℃孵育15分钟	400r/min震荡混匀1min，室温孵育60分钟	400r/min震荡混匀1min，37℃孵育15分钟，避光/绿光
第二步：	加入12µL R3，避光/绿光	加入12µL R3，避光/绿光	加入3µLR1A，避光/绿光
孵育	400r/min震荡混匀1min，37℃孵育10分钟，避光/绿光	400r/min震荡混匀1min，室温孵育30分钟，避光/绿光	400r/min震荡混匀1min， 37℃孵育10分钟，避光/绿光
读数	仪器读数，避光/绿光	仪器读数，避光/绿光	仪器读数，避光/绿光

* 注意：测试前，将R1A、R1F与R2按照体积比1:1:1进行预混，混合后请在1小时内使用完毕。

*若检测RPMI样本，可另加RPMI增强液（货号：UA086145），按每50μL R3与100μL RPMI增强液预混后加入，能显著提升试剂性能。

三、性能测试

3.1 完整标准曲线示例：

3.2 性能参数验证：

LOD：重复检测20次标准品C1，计算信号均值及SD，用标准曲线计算信号均值+2×SD对应的浓度值，即为最低检测限LOD。

检测流程	基质	LOD(pg/mL)	定量范围(pg/mL)	动态范围(pg/mL)
检测流程1	缓冲液	2.95	3~30000	0~100000
	DMEM	0.12	0.1~30000
	胎牛血清	7.21	7.2~30000
检测流程2	缓冲液	15.01	15~30000
检测流程3	RPMI	21.79	21.8~30000

精密度（Precision）：
板内精密度（Intra-Precision）：在同一次实验的孔板上，用已知低、中、高三种浓度的样本各重复检测10次，以评估该检测的板内精密度。标准品与样本均用不同流程检测。各浓度样本检测结果的变异系数（%CV）均低于10%，表明该方法在同一批次检测中具有良好的重现性。

检测流程	基质	重复性
检测流程	基质	低浓度	高浓度
检测流程1	缓冲液	3.5%	3.1%
	DMEM	2.5%	4.8%
	胎牛血清	2.1%	2.0%
检测流程2	缓冲液	6.0%	1.7%
检测流程3	RPMI	5.0%	4.4%

板间精密度（Inter-Precision）：在5次独立实验中分别对已知低、中、高三种浓度的样本进行检测。标准品和样本均采用检测流程1检测并设置5次重复。各浓度样本的检测结果均呈现较低的变异系数（%CV＜10%），表明该方法在不同批次检测间具有良好的重现性。

检测流程	基质	板间精密度
		低浓度	高浓度
检测流程1	缓冲液	10.0%	6.6%

准确度（Recovery）：

高浓度与低浓度质控品按1:9混合后测试其回收率，均在80%-120% ，表明该方法具有良好的准确度。

检测流程	基质	回收率
检测流程1	缓冲液	86.6%
	DMEM	85.4%
	胎牛血清	87.6%
检测流程2	缓冲液	86.3%
检测流程3	RPMI	86.8%

特异性：采用标准品缓冲液稀释下列蛋白至30ng/mL，测试交叉干扰率。

检测流程	检测物质	交叉反应率
检测流程1	Human IL-2	0.00%
	Human IL-5	0.00%
	Human IL-8	0.00%
	Human IL-10	0.10%

溯源：测试标准物质NIBSC 97/600，1IU/mL≈68pg/mL。

注意事项

试剂 R3 需避光使用，加样及孵育建议在绿光（<100LUX）环境下进行。
每次检测需重新定标，标准品各浓度点至少设 2 复孔测试，采用四参数（权重 1/Y²）拟合计算。
孵育时需控制好温度与时间，微孔板建议覆膜，仪器选用带ALPHA功能酶标仪。
校准品稀释基质应与待测样本一致，复溶后 2 小时内使用完毕。
不同批号试剂盒组分严禁混用。

Human IL-2R Kit (HICA)

储存条件