Human IgG Kit (HICA)

Datasheet COA

价格￥5,750.00 （ 1-2周）

货号 UA086034

规格

200T500T5000T

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产品介绍

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背景介绍

检验原理：
试剂盒采用的均相化学发光法HICA (Homogeneous Immuno Chemiluminescence Assay)是基于微珠的高灵敏度均相检测技术，该技术使用供体和受体两种微珠，结合于供体微珠上的分子与结合于受体微珠上的分子发生相互作用，当两个微珠达到足够接近的距离时（<200nm），能够检测出发光信号。

供体微珠表面的光敏剂经680nm的激光照射而受到激发，将周围的氧转变为单线态氧。单线态氧在溶液中扩散，当遇到受体微珠后可在受体微珠内引发一系列级联放大的化学反应，并最终发射出光。如图所示，供体微珠上的链霉亲和素与生物素化的抗体结合，抗体标记的受体微珠和生物素化的抗体分别结合IgG样品，产生检测信号。该技术无需洗涤，操作简单，相较于传统Elisa，具有较宽的检测范围、较高的灵敏度以及较低的背景。

产品规格

产品组分

Components	Concentration	200T	500T	5000T
Streptavidin-labeled Donor Beads	125×	8 µL	20 µL	200 µL
Anti-human IgG Antibody-labeled Acceptor Beads	500×	2 µL	5 µL	50 µL
Biotin-labeled Anti-human IgG Antibody	625×	2 µL	5 µL	50 µL
IgG Standard	1 mg/mL	5 µL	10 µL	20 µL
Assay Buffer	1×	4 mL	10 mL	100 mL

操作步骤

以384浅孔板为例
一、工作液配制
在使用供体微珠和受体微珠前，应确认微珠处于悬浮状态，若有轻微结块，请用超声将微珠重悬，切勿将微珠与冰块直接接触，使用过程中应避光。
所有成分均使用1×检测稀释液进行稀释，标准品解冻后的保存及稀释过程建议在冰上进行。其中供体微珠按照稀释倍数稀释到已经稀释的生物素化抗体中，两种试剂的混合溶液每孔用量5uL。
1. 抗人IgG抗体标记受体微球：受体微球重悬后，用检测稀释液稀释500倍，每孔用量5uL。
2. 生物素标记抗人IgG抗体和链霉亲和素标记供体微球：用检测稀释液稀释生物素化的抗体后，将供体微球直接稀释到稀释后的抗体中，每孔用量5uL。
3. IgG标准品/待测样品：标准品解冻后应保存在冰上，用检测稀释液进行梯度稀释，每孔用量10uL。
应按照实验所需标准曲线数量进行调整稀释，例如：取1uL IgG标准品稀释到249uL检测稀释液中为Std 1，3×梯度稀释至Std 10。

Standard	标准品稀释	工作液浓度（ng/mL）
Std 1	1uL标准品储存液+ 249uL标准品稀释液	4000.00
Std 2	10uL std 1 + 20uL标准品稀释液	1333.33
Std 3	10uL std 2 + 20uL标准品稀释液	444.44
Std 4	10uL std 3 + 20uL标准品稀释液	148.15
Std 5	10uL std 4 + 20uL标准品稀释液	49.38
Std 6	10uL std 5 + 20uL标准品稀释液	16.46
Std 7	10uL std 6 + 20uL标准品稀释液	5.49
Std 8	10uL std 7 + 20uL标准品稀释液	1.83
Std 9	10uL std 8 + 20uL标准品稀释液	0.61
Std 10	10uL std 9 + 20uL标准品稀释液	0.20
0	20uL标准品稀释液	0.00

二、加样
样品、标准品及检测试剂工作液准备好后，按照表格加样顺序进行加样和孵育。

组分	试验孔	对照孔
组分	试验孔	阴性对照	供体微球对照	受体微球对照
IgG标准品/待测样品	10uL	--	--	--
稀释液	--	10uL	15uL	10uL
抗人IgG抗体标记受体微球	5uL	5uL	--	5uL
步骤1：室温孵育1小时
生物素标记抗人IgG抗体和链霉亲和素标记供体微球	5uL	5uL	5uL	--
稀释液	--	--	--	5uL
步骤2：室温孵育1小时

实验应包括以下对照孔：
（1）缓冲液对照（阴性对照）：排除缓冲液对信号值的影响，作为背景值用于计算反应体系的特异性信号值。
（2）供体/受体微球对照孔：检测单独的供体/受体微球在缓冲液中的信号值，用于验证微球的正常信号值及背景。

三、检测
实验前请先确认酶标仪的功能和配置，在兼容的均相化学发光发的酶标仪上检测。

四、结果计算
1. 计算每个孔的受体和供体发射信号的增量比Net signal
Net signal = [signal (实验孔) - signal (阴性对照孔)] / signal (阴性对照孔)*100
2. 计算复孔变异稀释CV%
变异系数CV% = 标准差/平均值*100%

五、示例数据
以下示例仅用于参考，具体实验体系应根据具体情况进行调整优化。每次检测应以同次实验标准品所绘制的标准曲线计算标本含量。

生物活性

Human IgG Kit (HICA)

生物活性