UniOne^® TR-FRET Human PD1/PD-L1 Binding Kit

价格￥4,380.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA086026

规格

100T500T2500T10000T

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背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定 PD1 与 PD-L1 之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。
如图所示，PD1 与 PD-L1 之间的相互作用是通过使用 Eu 标记的抗 Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Ac 标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于PD1 与 PD-L1结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。Pembrolizumab 阳性药可阻断PD1 与 PD-L1的结合，使FRET信号无法产生，所筛选药物对 PD1 与 PD-L1阻断效果越强，信号越低。该特定信号与 PD1 与 PD-L1 相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

产品规格

产品组分

组分	浓度	100T	500T	2500T	10000T	储存温度
Pembrolizumab	5μM	5μL	10μL	50μL	200μL	-80℃
Tag1-PD-L1 protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Tag2- PD1 protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Anti-Tag1 Eu antibody	50×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80℃
Anti-Tag2 Ac antibody	12.5×	40μL	200μL	1000μL	4000μL	-80℃
Detection buffer	10×	400μL	2mL	10mL	40mL	-80℃

注意：所有首次解冻后立即分装，并按建议储存温度保存，避免稀释后储存及反复冻融。

操作步骤

1、试剂准备

1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

表1. 试剂配制

试剂名称	配置	每个检测孔用量μL
Tag1-PD-L1 protein	取20μL Tag1-PD-L1 protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2- PD1 protein	取20μL Tag2- PD1 protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Mix	取50μL Anti-Tag1 Eu antibody 原液，加入 1×Detection buffer 2.45mL, 混匀备用; 取200μL Anti-Tag2 Ac antibody 原液，加入 1× Detection buffer 2.3mL, 混匀备用; Anti-Tag1 Eu antibody和Anti-Tag2 Ac antibody分别稀释后1:1混匀备用。	10
Pembrolizumab	按照反应体系，化合物用1×Detection buffer稀释至体系终浓度的10倍，作为阳性对照。例如体系终浓度为10nM, 应稀释浓度为100nM。同时以1× Detection buffer稀释的DMSO作为阴性对照孔。	2

1.2 待测样品梯度稀释

以Pembrolizumab为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰的影响，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表2. 阳性药Pembrolizumab梯度稀释（根据实际情况调整）

	Pembrolizumab终浓度nM	Pembrolizumab配置浓度nM	配置方法
①	10	100	1μL 5μM Pembrolizumab+49μL 1× Detection buffer
②	5	50	25μL ① +25μL 1× Detection buffer
③	2.5	25	25μL ② +25μL 1× Detection buffer
④	1.25	12.5	25μL ③ +25μL 1× Detection buffer
⑤	0.63	6.3	25μL ④ +25μL 1× Detection buffer
⑥	0.31	3.1	25μL ⑤ +25μL 1× Detection buffer
⑦	0.16	1.6	25μL ⑥ +25μL 1× Detection buffer
⑧	0.08	0.8	25μL ⑦ +25μL 1× Detection buffer
⑨	0.04	0.4	25μL ⑧ +25μL 1× Detection buffer
⑩	0.02	0.2	25μL ⑩ +25μL 1× Detection buffer
Blank	0	0	25μL 1× Detection buffer
Eu+Ac

2、加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：2μL测待样品，4μL Tag2-PD1 protein工作液，4μL Tag1-PD-L1 protein工作液，10μL混匀的Mix，依次加入384浅孔板中；

2.2 最大值对照： 2μL 1× Detection buffer稀释的，4μL Tag2-PD1 protein工作液，4μL Tag1-PD-L1protein工作液，10μL混匀的Mix；

2.3 质控孔(NC)：10μL 1×Detection buffer加10μL Mix。