UniOne^® TR-FRET Human BCL-XL/CRBN PROTAC Binding Kit

价格￥4,380.00 （ 1-2周）

货号 UA086017

规格

100T500T2500T10000T

数量

产品介绍

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背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定分子胶 XZ739 及待检测化合物介导的 DDB1/CRBN 复合体与 BCL-XL 相互作用。该方法是实现简单快速的检测能够介导 DDB1/CRBN 复合体与 BCL-XL 相互作用的小分子的高通量形式。
如下图所示，DDB1/CRBN 和 BCL-XL 之间的相互作用是通过使用Eu标记的抗Tag1抗体（TR-FRET 供体）和 Accepter 标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于分子胶 XZ739 介导了 DDB1/CRBN 与 BCL-XL 的相互作用，供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与 XZ739 和 DDB1/CRBN、BCL-XL 的相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

产品规格

产品组分

组分	浓度	100T	500T	2500T	10000T	储存温度
Tag1-CRBN protein	50×	8μL	40μL	200μL	800μL	-80℃
Tag2- BCL-XL protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
XZ739	4mM	5μL	5μL	25μL	100μL	-80℃
Anti-Tag1 Eu antibody	100×	5μL	25μL	125μL	500μL	-80℃
Anti-Tag2 Ac antibody	25×	20μL	100μL	500μL	2000μL	-80℃
Detection buffer	10×	400μL	2mL	10mL	40mL	-80℃

注意：所有首次解冻后立即分装，并按建议储存温度保存，避免稀释后储存及反复冻融。

操作步骤

1、试剂准备

1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

表1. 试剂配制

试剂名称	配置	每个检测孔用量μL
Detection buffer	取2mL 10 × Detection buffer1加入18mL去离子水，稀释至1×，混匀备用。	-
XZ739	按照反应体系，化合物用1×Detection buffer稀释到待测浓度。	2
Tag1-CRBN protein	取40μL Tag1-CRBN protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2- BCL-XL protein	取20μL Tag2- BCL-XL protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Antibody Mix	取25μL Anti-Tag1 Eu antibody 原液，加入 1×Detection buffer 2.475mL, 混匀；取100μL Anti-Tag2 Ac antibody 原液，加入 1× Detection buffer 2.4mL, 混匀；二者1:1混合为Antibody Mix。	10

1.2 待测样品梯度稀释

以XZ739为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰的影响，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表2. XZ739梯度稀释（根据实际情况调整）

2、加样及对照

2.1 待测样本：4μL Tag1-CRBN protein工作液，4μL Tag2- BCL-XL protein工作液，2μL梯度稀释待测样本，10μL混匀的Antibody Mix，依次加入384浅孔板中。

2.2 阳性药标曲：4μL Tag1-CRBN protein工作液，4μL Tag2- BCL-XL protein工作液，2μL 梯度稀释XZ739，10μL Antibody Mix。

2.3 空白对照孔：2μL 1× Detection buffer代替待测样本；

2.4 NC：10μL 1× Detection buffer加10μL Antibody Mix。

所有样本加完后，离心，盖封板膜，室温孵育2小时。

3、检测

阳性药标曲	待测样本	空白对照孔	NC
2μL 梯度稀释XZ739	2μL 梯度稀释待测样本	2μL 1× Detection buffer	10μL 1× Detection buffer 加10μL Antibody Mix
4μL Tag1-CRBN protein
4μL Tag2- BCL-XL protein
10μL Antibody Mix
用封板膜封住板孔，室温孵育2小时；