产品中心药物筛选试剂盒 UniOne®TR-FRET

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UniOne^® TR-FRET Human IL17A/IL17RA Binding Kit

Datasheet COA

价格￥13,080.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA086014

规格

500T100T2500T10000T

数量

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背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定 IL17A 与 IL17RA 之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。
如图所示，IL17A 与 IL17 RA 之间的相互作用是通过使用 Eu 标记的抗 Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Accepter 标记的 IL17A 蛋白（TR-FRET受体）检测的。由于IL17A 与 IL17 RA结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与 IL17A 与 IL17 RA 相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

产品规格

来源

Human
储存条件

-80℃

产品组分

Table 1. Reagents and Storage Conditions

Component	Concentration	100 TESTS	500 TESTS	2500 TESTS	10000 TESTS	Storage Temperature
IL17A-01A protein	100×	5μL	25μL	125μL	500μL	-80°C
Tag1- IL17 RA protein	100×	8μL	40μL	200μL	800μL	-80°C
Anti-Tag1 Eu dye antibody	50×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80°C
Detection buffer	10×	400μL	2mL	10mL	40mL	-80°C

*Reagents should be protected from repeated freeze-thaw cycles. Aliquot upon first thaw and store according to the recommended conditions. The shelf life is one year.

操作步骤

1试剂准备

使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20uL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

1.1 缓冲液（1×）配制

2mL Detection buffer （10×）中加入18mL无菌水，混匀备用

表2. 试剂配置及用量

试剂名称	配置	用量（μL）
待测样本	按照反应体系，待测样本用1×Detection buffer稀释到待测浓度。若用到DMSO，保证所有检测孔中DMSO的含量一致。	2
IL17A-01A protein	取25μL IL17A-01A protein原液，1×Detection buffer稀释至2.5mL ,混匀备用。	5
Tag1- IL17 RA protein	取40μL Tag1- IL17 RA protein原液，1×Detection buffer稀释至4mL ,混匀备用。	8
Anti-Tag1 Eu dye antibody	取50μL Anti-Tag1 Eu dye antibody，用1×Detection buffer稀释至2500μL，混匀。	5

1.2 待测样品梯度稀释

使用1×Detection buffer进行待测样品的配制。若样品的储液为DMSO，建议保持体系中DMSO 含量一致，(检测缓冲波中不含DMSO，请根据标准品或待测样品稀释情况向1×Detection buffer中添加DMSO)最高不超过2%。

2 加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：2μL 待测样本，8μL Tag1-IL17 RA protein工作液，5μL IL17A-01A protein，5μL Anti-Tag1 Eu dye antibody，依次加入384浅孔板中。

2.2 最小值对照孔：10μL 1× Detection buffer（含DMSO），5μL IL17A-01A protein，5μL Anti-Tag1 Eu dye antibody。

2.3 最大值对照孔：2μL 1× Detection buffer（含DMSO），8μL Tag1-IL17 RA protein，5μL IL17A-01A protein，5μL Anti-Tag1 Eu dye antibody。

2.4 Eu only：15μL 1× 缓冲液加5μL稀释后的Anti-Tag1 Eu dye antibody。

表3. 加样及对照

	最小值对照	最大值对照	样本	Eu Only
第一步	2μL 1× Detection buffer（含DMSO）	2μL 1× Detection buffer（含DMSO）	2μL 梯度稀释待测样本	15uL 1× Detection buffer
	8μL 1× Detection buffer（含DMSO）	8μL Tag1-IL17 RA protein
第二步	5μL IL17A-01A protein
	5μL Anti-Tag1 Eu dye antibody
第三步	用封板膜封住板孔，室温孵育2h；

*阴性对照和质控，推荐使用与待测样品基质相同的溶液替代1×Detection buffer。

*所有检测孔中DMSO或其他基质保持一致。

3.检测

在兼容TR-FRET的酶标仪上检测（激发光为320nm，检测620nm和665nm的发射波长）。

【结果计算】

1. 计算信号值：665nm荧光信号比620nm荧光信号再乘以10000，即

信号值= (665/620)*10000

2. 根据信号值计算δ值：

δ值= (Std-NC)/NC*100

3.计算CV（%）

CV（%）= Standard Deviation/Mean Ratio×100%

【数据示例】

以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。

IL-17RA,nM	Ratio	CV (%)	δ值
12.5	793.9	2%	2847.3
6.25	853.2	0%	3066.9
3.13	760.1	2%	2720.2
1.56	566.9	2%	2004.5
0.78	354.1	5%	1213.1
0.39	204.3	1%	658.4
0.20	118.1	0%	338.3
0.10	77.9	3%	189.1
0.05	56.5	1%	109.8
0.024	45.4	1%	68.4
0	33.8	1%	25.4
Eu only	27.0	3%	-

生物活性

UniOne® TR-FRET Human IL17A/IL17RA Binding Kit

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