产品中心药物筛选试剂盒 UniOne®TR-FRET

UniOne^® TR-FRET Human IL6/IL6R Binding Kit

Datasheet COA

价格￥4,380.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA086013

规格

100T500T2500T10000T

数量

产品介绍

产品介绍评论(0)

背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定 IL6 与 IL6R 之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。
如图所示，IL6 与 IL6R 之间的相互作用是通过使用 Eu 标记的抗 Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Accepter 标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于IL6 与 IL6R结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与 IL6 与 IL6R 相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

产品规格

来源

Human
储存条件

-80℃

产品组分

Table 1. Reagents and Storage Conditions

Component	Concentration	500 TESTS	2500 TESTS	10000 TESTS	Storage Temp.
Tag1-IL6 protein	100×	20μL	100μL	400μL	-80°C
Tag2-IL-6R protein	100×	20μL	100μL	400μL	-80°C
Tocilizumab	10 μM	10 μL	50 μL	200 μL	-80°C
Anti-Tag1 Eu cryptate antibody	50×	50μL	250μL	1000μL	-80°C
Anti-Tag2 Acceptor antibody	12.5×	200μL	1000μL	4000μL	-80°C
Detection buffer	10×	2mL	10mL	40mL	-80°C

* Avoid repeated freeze-thaw cycles of reagents. Aliquot upon first th

操作步骤

1、试剂准备

1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。

384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

表1. 试剂配制

试剂名称	配置	每个检测孔用量μL
Detection buffer 1	取2mL 10X Detection buffer1加入18mL去离子水，稀释至1×，混匀备用。
待测样品/标准品稀释	按照反应体系，待测样本用1×Detection buffer稀释到待测浓度。若用到DMSO，保证所有检测孔中DMSO的含量一致。	2
Tag1-IL6 protein	取20μL Tag1-IL6 protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2- IL-6R protein	取20μL Tag1-IL6R protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Antibody Mix	取50μL Anti-Tag1 Eu antibody，用Detection buffer稀释至2500μL，混匀；取200μL Anti-Tag2 Ac antibody，用Detection buffer稀释至2500μL，混匀，1:1混合为Antibody Mix。	10

1.2 待测样品梯度稀释

使用1×Detection buffer进行待测样品和标准品的配制。若样品的储液为DMSO，建议保持体系中DMSO 含量一致(检测缓冲波中不含DMSO，请根据标准品或待测样品稀释情况向1×Detection buffer中添加DMSO)，最高不超过2%。试剂盒中Tocilizumab 标准品为10μM PBS 母液。请根据实验情况配制标准品总量，以下内容仅供参考。

表2. Tocilizumab 梯度稀释（根据实际情况调整）

	Tocilizumab终浓度（nM）	Tocilizumab配制浓度（nM）	配置方法
①	10.00	100	1μL 10μM 母液+99μL 1× Detection buffer
②	5.00	10	50μL ① +50μL 1× Detection buffer
③	2.50	5	50μL ② +50μL 1× Detection buffer
④	1.25	2.5	50μL ③ +50μL 1× Detection buffer
⑤	0.63	1.25	50μL ④ +50μL 1× Detection buffer
⑥	0.31	0.625	50μL ⑤ +50μL 1× Detection buffer
⑦	0.16	0.32	50μL ⑥ +50μL 1× Detection buffer
⑧	0.08	0.16	50μL ⑦ +50μL 1× Detection buffer
⑨	0.04	0.08	50μL ⑧ +50μL 1× Detection buffer
⑩	0.02	0.04	50μL ⑨ +50μL 1× Detection buffer
Blank	0	0	100μL 1× Detection buffer

2、加样及对照

2.1 待测样本：2μL 梯度稀释待测样本，4μL Tag1- IL6 protein工作液，4μL Tag2- IL6R protein工作液，10μL Antibody Mix，依次加入384浅孔板中。

2.2 阳性药标曲：2μL 梯度稀释Tocilizumab，4μL Tag1-IL6 protein，4μL Tag2- IL-6R protein，10μL Antibody Mix。

2.3 阳性对照孔（PC）：2μL 1× Detection buffer，4μL Tag1- IL6 protein工作液，4μL Tag2- IL6R protein工作液，10μL Antibody Mix。

2.4 阴性对照孔（NC）：15μL 1× 缓冲液加5μL稀释后的Anti-Tag1 Eu antibody。

所有样本加完后，离心，盖封板膜，室温孵育2小时。

	阳性药标曲	待测样本	阳性对照孔（PC）	阴性对照孔（NC）
第一步	2μL 梯度稀释Tocilizumab	2μL 梯度稀释待测样本	2μL 1× Detection buffer	15μL 1× Detection buffer 加5μL 1×Anti-Tag1 Eu antibody
	4μL Tag1-IL6 protein
	4μL Tag2- IL-6R protein
第二步	10μL Antibody Mix
	用封板膜封住板孔，室温孵育2h