UniOne^® TR-FRET Human IL2/IL2R Binding Kit

Datasheet COA

价格￥13,080.00 （ 1-2周）

货号 UA086010

规格

500T2500T10000T

数量

产品介绍

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背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定 IL2 与 IL2R 之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。
如图所示，IL2 与 IL2R 之间的相互作用是通过使用 Eu 标记的抗 Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Accepter 标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于IL2 与 IL2R结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与 IL2 与 IL2R 相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

产品规格

来源

Human
储存条件

-80℃

产品组分

Component	Concentration	100 TESTS	500 TESTS	2500 TESTS	10000 TESTS	Storage Temp.
Tag1-IL2 protein	40×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80°C
Tag2-IL2R protein	100×	4μL	20μL	100μL	400μL	-80°C
Basiliximab	100×	3μL	10μL	50μL	200μL	-80°C
Anti-Tag1 Eu dye antibody	50×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80°C
Anti-Tag2 Ac antibody	12.5×	40μL	200μL	1000μL	4000μL	-80°C
Detection buffer	10×	400μL	2mL	10mL	40mL	-80°C

*Repeated freeze-thaw cycles should be avoided. Aliquot upon first thaw and store according to the specified conditions. Valid for one year.

操作步骤

1试剂准备

使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

1.1 缓冲液（1×）配制

2mL Detection buffer （10×）中加入18mL无菌水，混匀备用

表2. 试剂配置及用量

试剂名称	配置	用量（μL）
Basiliximab	按照反应体系，化合物用1×Detection buffer稀释到待测浓度。保证所有检测孔中DMSO的含量一致。	2
Tag1-IL2 protein	取50μL Tag1-IL2 protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2- IL2R protein	取20μL Tag1-IL2R protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Antibody Mix	取50μL Anti-Tag1 Eu dye antibody 原液，加入 1×Detection buffer 2.45mL, 混匀；取200μL Anti-Tag2 Ac antibody 原液，加入 1× Detection buffer 2.3mL, 混匀，1:1混合为Antibody Mix。	10

1.2 待测样品1.25倍梯度稀释

以Basiliximab为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表3. 样品梯度稀释

	Basiliximab终浓度,nM	配制浓度，nM	配置方法
①	10.00	100.0	2μL 10μM Basiliximab+198μL 1× Detection buffer
②	8.00	80.0	150μL ① +37.5μL 1× Detection buffer
③	6.40	64.0	150μL ② +37.5μL 1× Detection buffer
④	5.12	51.2	150μL ③ +37.5μL 1× Detection buffer
⑤	4.10	41.0	150μL ④ +50μL 1× Detection buffer
⑥	3.28	32.8	150μL ⑤ +37.5μL 1× Detection buffer
⑦	2.62	26.2	150μL ⑥ +37.5μL 1× Detection buffer
⑧	2.10	21.0	150μL ⑦ +37.5μL 1× Detection buffer
⑨	1.68	16.8	150μL ⑧ +37.5μL 1× Detection buffer
⑩	1.34	13.4	150μL ⑨ +37.5μL 1× Detection buffer
Blank		0	37.5μL 1× Detection buffer

2 加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：4μL Tag1-IL2R protein工作液，2μL待测样本，室温孵育10min，再加入4μL Tag1-IL2 protein工作液，10μL混匀的Antibody Mix（Tag1-IL2 protein可与Antibody Mix等比例混合后加入），依次加入384浅孔板中。

2.2 最高值对照孔：2μL 1× Detection buffer代替所检测样本；

2.3 最高值对照孔：2μL 100nM Basiliximab代替所检测样本；

2.4 NC(Eu only)：16uL 1× Detection buffer加4uL稀释后的Anti-Tag1 Eu dye antibody。

表4. 加样及对照

	最高值对照孔	最低值对照孔	样本	NC
第一步	2μL 1× Detection buffer	2μL 100nM Basiliximab	2μL 梯度稀释待测样本	15μL 1× Detection buffer 加5μL 1×Anti-Tag1 Eu dye antibody
	4μL Tag2- IL-2R protein
	室温孵育10 min4μL
第二步	Tag1-IL2 protein
	10μL Antibody Mix
	用封板膜封住板孔，室温孵育至过夜；