产品中心药物筛选试剂盒 UniOne®TR-FRET

UniOne^® TR-FRET Human IgG Sandwich Assay Kit

Datasheet COA

价格￥1,800.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA085006

规格

100T500T2500T10000T

数量

产品介绍

产品介绍评论(0)

背景介绍

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术，用于精确测定细胞培养上清中的人IgG抗体或带有hFc标签的蛋白的浓度。试剂盒内包含一个抗体标记供体Eu（Anti-human IgG-Eu，Donor）和另一不同抗原表位抗体标记受体Ac（Anti-Human IgG-Ac，Acceptor）。Anti-human IgG-Eu及Anti-human IgG-Ac与Human IgG结合后，在320nm的光激发下，Donor释放能量并将其传递至Acceptor，导致其受到激发，从而发射出特定波长的光（665nm）。
试剂盒中Anti-human IgG-Eu与Human IgG-Ac能够与样品或标准品中的Human IgG特异性结合并形成夹心，导致665nm信号升高。该信号与标准品中的human IgG浓度成正比，因此可以利用标准曲线对样品中的Human IgG进行精确的定量。该均相实验操作简单，无需洗涤，一步法即可检测。

产品规格

来源

Human
储存条件

-80℃

产品组分

表1.试剂盒组分

组分	浓度	100T	500T	2500T	10000T	储存温度
Anti-Human IgG-Eu	50×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80℃
Anti-Human IgG-Ac	50×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80℃
IgG标准品	40μg/ml	10μL	50μL	200μL	400μL	-80℃
Detection Buffer	1×	1.5mL	6ml	30mL	120mL	-80℃
Diluent Buffer	1×	1.5mL	6ml	30mL	120mL	-80℃

注意：所有首次解冻后立即分装，并按建议储存温度保存，避免稀释后储存及反复冻融。

操作步骤

1、试剂准备

使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20uL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

1.1 试剂配制：

表2. 试剂配置及用量

试剂名称	配置	用量（μL）
IgG标准品或待测样本	按照反应体系，化合物用Diluent buffer稀释到待测浓度。	10
Antibody Mix	取50μL Anti-Human IgG-Eu，用1×Detection buffer稀释至2500μL，混匀；取50μL Anti-Human IgG-Ac，用1×Detection buffer稀释至2500μL，混匀，1:1混合为Antibody Mix。	10

1.2标准品或样品稀释：

使用1×Diluent Buffer进行待测样品和标准品的配制。若样品的储液为DMSO，建议保持体系中DMSO 含量一致，(检测缓冲波中不含DMSO，请根据标准品或待测样品稀释情况向1×Detection buffer中添加DMSO)目最高不超过2%。请根据实验情况配制标准品总量，以下内容仅供参考。

表3. 标准品梯度稀释

	标准品配制浓度（ng/ml）	配置方法
①	4000	5μL 40μg/mL标准品原储存液+45μL 1×Diluent buffer
②	2000	25μL ① +25μL 1×Diluent buffer
③	1000	25μL ② +25μL 1×Diluent buffer
④	500	25μL ③ +25μL 1×Diluent buffer
⑤	250	25μL ④ +25μL 1×Diluent buffer
⑥	125	25μL ⑤ +25μL 1×Diluent buffer
⑦	62.5	25μL ⑥ +25μL 1×Diluent buffer
⑧	31.25	25μL ⑦ +25μL 1×Diluent buffer
⑨	15.63	25μL ⑧ +25μL 1×Diluent buffer
⑩	7.81	25μL ⑨ +25μL 1×Diluent buffer
⑪	3.91	25μL ⑩ +25μL 1×Diluent buffer
Blank	0	25μL 1×Diluent buffer

*Blank正常加入Anti-human IgG-Eu和Anti-human IgG-Ac，NC组为只加入Anti-human IgG-Eu，用于计算Net Signal。

用稀释缓冲液或培养基稀释所有待测样本，连续稀释应在 2000-3.9ng/ml 范围内进行（工作溶液）；若待测样品浓度在 2000-3.9 ng/ml 范围内，直接取 10μL 上清进行检测。

2、加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：10uL混匀的Antibody Mix，10μL标准品或待检测样品，依次加入384浅孔板中；

2.2 空白对照孔（Blank）：1× Detection buffer；

2.3 NC：15μL 1× Detection buffer加5μL稀释后的Anti-Human IgG-Eu。

表4. 加样及对照

	Blank	样本	NC
第一步	10μL 1× Detection buffer	10μL 梯度稀释待测样本	15μL 1× Detection buffer 加5uL 1×Anti-Human IgG-Eu
	10μL Antibody Mix
第二步	用封板膜封住板孔，室温孵育2h。