ActRIIB Enzyme Activity Inhibitor Screening Kit

试验体系及流程

1、反应体系

20 μL 反应体系中，各组分体积和浓度对照信息如下表所示

2，试剂准备

 请在室温解冻缓冲液，使用前平衡至室温。解冻后的缓冲液可长期存放于2-8 ℃。

 请在冰上解冻除缓冲液外的其他试剂，使用前平衡至室温。此类试剂需避免反复冻融，推荐按需分装成小管，妥善储存于推荐温度。

 请使用试剂盒内的缓冲液稀释和准备相关试剂，以确保实验结果的准确性和稳定性。

3，试剂准备

3.1 1X Assay buffer D 工作液配制

 Assay buffer 的储液为1X，使用前加入终浓度为50 μM 的DTT，即可配制成1X Assay

buffer D工作液，用于后续配制化合物、蛋白、底物等工作液。每次需要现配现用。

3.2 样品的配制

 使用1X Assay buffer D 工作液进行待测样品的配制。若样品的储液为DMSO，建议检测体系中DMSO 含量保持一致，在最终5 μL 反应体系中终浓度低于1%。

ActRIIB 蛋白储液为0.3 mg/mL，使用1X Assay Buffer D工作液稀释成25 μg/mL，即可

配制成2.5X 蛋白工作液，每孔用量2 μL，终浓度为10 μg/mL。例如取83.3 μL ActRIIB

储液加入到916.7 μL 1X Assay buffer 工作液中，即可得到1000 μL 2.5X 蛋白工作液。

 蛋白工作液需现配现用。初次使用后，建议将蛋白在冰上按需分装，于-80 ℃保存，避免,

底物+ATP 溶液配制(2.5x): ATP 储液均为400X, Substrate 储液均为1000X。使用1X Assay Buffer D工作液对Substrate 和ATP 进

行稀释，配制成2.5X 底物混合工作液，每孔用量2 μL。例如分别取2.5 μL Substrate 储液

和6.25 μL ATP 储液加入到991.25 μL1X Assay buffer 工作液中，即可得到1000 μL 2.5X

底物工作液。

 底物工作液需现配现用。初次使用后，建议将Substrate 和ATP 分别按需分装，于-20 ℃

保存，避免反复冻融。

4，操作步骤