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UA-Glo^® Glucose-Uptake Luminescence Detection Kit

UA-Glo® 葡萄糖摄取发光法检测试剂盒

Datasheet COA

价格￥2,480.00 （ 1-2周）

货号 UA079049

规格

5ml10ml50ml

数量

产品介绍

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背景介绍

哺乳动物细胞的葡萄糖摄取可以通过检测细胞内产生的2-脱氧葡萄糖-6-磷酸 (2DG6P) 来测量。哺乳动物细胞葡萄糖代谢不会产生2DG6P，向细胞培养基中加入2-脱氧葡萄糖 (2DG) 后，2DG会被葡萄糖转运体转运入细胞并在细胞内快速被葡萄糖-6-磷酸酶磷酸化，生成2DG6P。细胞内的酶无法进一步修饰2DG6P，并且2DG6P的不可透膜性使其在细胞内聚集，因此通过检测细胞内2DG6P可以测量细胞对葡萄糖的摄取。
UA-Glo® 葡萄糖摄取发光法检测试剂盒通过葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，还原酶和荧光素酶的偶联反应检测2DG6P含量。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用于2DG6P使NAD还原为NADH，还原酶则利用NADH将还原酶底物 (也是荧光素前体) 还原为荧光素，最后荧光素经荧光素酶作用产生发光而被检测，其发光强度和2DG6P含量呈正比。试剂盒还包括终止缓冲液和中和缓冲液。终止缓冲液含有盐酸和去污剂，可以快速裂解细胞和终止细胞代谢，并且灭活细胞内的酶和降解还原型NAPD(P)H，如此处理后细胞内的酶和还原型NAPD(P)H就不会干扰后续的2DG6P检测。中和缓冲液则可提高pH值以利于2DG6P检测试剂的反应。
UA-Glo® 葡萄糖摄取发光法检测试剂盒为均质型检测试剂，具有信噪比高、重复性好、稳定性好的特点，适合样品的批量处理。

产品规格

分子别名

UA-Glo^® 葡萄糖摄取发光法检测试剂盒
储存条件

干冰运输。避光储存于-80℃，有效期见试剂瓶标签。初次使用后建议将试剂按需分装避光-80℃保存。荧光素检测液和还原酶底物冻融不超过3次。终止缓冲液和中和缓冲液可保存于4℃。

产品组分

UA-Glo® 葡萄糖摄取发光法检测试剂盒组分和规格如下。可检测的96-孔板反应数按照每孔加入50 μL样品，25 μL终止缓冲液，25 μL中和缓冲液和100 μL 2DG6P检测试剂计算。

规格	组分和规格	96-孔板反应数
5ml	终止缓冲液：15 mL 中和缓冲液：15 mL 荧光素检测液：5 mL 还原酶底物：25 μL 2-脱氧葡萄糖 (2DG, 100mM)：250 μL 2DG6P (1mM)：50 μL	50
10ml	终止缓冲液：15 mL 中和缓冲液：15 mL 荧光素检测液：10 mL 还原酶底物：50 μL 2-脱氧葡萄糖 (2DG, 100mM)：250 μL 2DG6P (1mM)：50 μL	100
50ml	终止缓冲液：15 mL 中和缓冲液：15 mL 荧光素检测液：50 mL 还原酶底物：250 μL 2-脱氧葡萄糖 (2DG, 100mM): 250 μL 2DG6P (1mM)：50μL	500

操作步骤

UA-Glo® 葡萄糖摄取发光法检测试剂盒通过葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，还原酶和荧光素酶的偶联反应检测2DG6P含量。荧光素酶反应有极高的灵敏度，并且pH，温度，实验系统设定等参数对反应均有较大影响，多数实验条件下不建议直接比较样品绝对读值。建议在每块实验板设定同样的参照化合物和溶剂载体对照，实验样品读值用参照化合物和溶剂载体对照读值归一化后再进行数据处理和比较。也可以在每块实验板设立和样品同样方式处理的2DG6P标准品以定量样品的2DG6P含量。

UA-Glo® 葡萄糖摄取发光法检测试剂盒检测细胞裂解液中的2DG6P的线性最高检测浓度为30μM。如果样品需要稀释，用户需根据具体实验优化样品稀释度。

以下实验以96-孔板为例说明葡萄糖摄取的检测。其他培养板的检测中的2DG，终止缓冲液和中和缓冲液的加入量可以参考附表。

1)96孔白色透明细胞培养板接种合适密度的实验细胞

2)根据实验需求进行细胞处理后进行葡萄糖摄取检测

3)培养基中的葡萄糖会干扰检测结果。如培养基中含葡萄糖，弃去培养基后用 100 μL PBS洗涤细胞1-3次以彻底去除培养基中残存葡萄糖，弃去最后洗涤的PBS。慢速的移除培养基和PBS可以更有效的去除葡萄糖。如果培养基中无葡萄糖，可以在步骤4中配制高浓度的2DG溶液，例如10mM直接加入培养基至终浓度1mM

4)用PBS配制1mM 2DG溶液，向步骤3的实验板中每孔加入50μL，室温 (22℃-25℃) 孵育10min。孵育时间可能需要根据具体实验优化

5)每孔加入25μL终止试剂，振荡15sec混匀

6)每孔加入25μL中和试剂，振荡15sec混匀

7)2DG6P检测试剂使用1小时前，按步骤8/9/10 配制2DG6P检测试剂配制。配置好的2DG6P检测试剂置于室温1hr后使用可以最大限度的降低检测背景

8)取出荧光素检测液于室温融化后颠倒混匀，取实验所需体积的荧光素检测液，平衡至室温。剩余荧光素检测液按需分装，保存于-80℃。荧光素检测液冻融次数不超过3次

9)取出还原酶底物于室温融化，冰上保存。配制2DG6P检测试剂后剩余的还原酶底物立即按需分装，保存于-80℃。还原酶底物冻融次数不超过3次

10)2DG6P检测试剂配制：还原酶底物按200x加入荧光素检测液即为2DG6P检测试剂。2DG6P检测试剂按需现配现用，不建议保存

11)步骤6的实验板中每孔加入100 μL 2DG6P检测试剂，振荡15sec混匀

12)室温孵育0.5-3hr。信号会持续增加，直至所有的2DG6P被消耗完

13)在发光或多功能读板仪上读取发光信号

附表：不同规格的培养板中各组分的加入量：

孔数	2DG (1mM/PBS) (μL)	终止缓冲液 (μL)	样品转移	中和缓冲液(μL)	2DG6P检测试剂(μL)
6	1000	500	转移75μL样品到96孔白色实验板	25	100
12	500	250		25	100
24	250	125		25	100
48	100	50		25	100
96	50	25	不需转移样品	25	100
384	10	5	不需转移样品	5	20