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UA-Glo^® NAD(P)H Detection System

Datasheet COA

价格￥1,300.00 （ 1-2周）

货号 UA079042

规格

10ml50ml

数量

产品介绍

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背景介绍

NADH和NADPH (下文二者统称为NAD(P)H) 是很多酶反应的反应物或产物，通过定量测定NAD(P)H)可以直接或间接测定许多酶的活性。UA-Glo® NAD(P)H检测试剂盒通过还原酶和荧光素酶的偶联反应，即还原酶可以等效得利用NADH或NDPH 为反应物，通过NAD(P)H将还原酶底物转化为荧光素，荧光素经荧光素酶作用产生发光而被检测，其发光强度和体外酶反应消耗或生成的NAD(P)H)的数量呈比例，且此偶联反应不检测也不受氧化型NAD(P)的影响。
UA-Glo® NAD(P)H检测试剂为均质型试剂，只需一次加样就可进行检测，减少了多次实验操作可能导致的实验误差。该试剂具有信噪比高、重复性好、稳定性好的特点，其稳定的辉光信号(半衰期>2hr) 使该产品尤其适合酶的抑制剂的高通量筛选。

产品规格

储存条件

干冰运输。收到试剂盒后避光储存于-80℃，有效期12个月。初次使用后试剂分装避光保存，还原酶底物-80℃保存，荧光素检测液和还原酶-20℃及以下保存，长期 (>3个月) 储存于-80℃，避免反复冻融。

产品组分

UA-Glo®NAD(P)H检测试剂盒组分和规格如下表。以酶反应体积96孔板实验50μL，384孔板实验25μL计算，10mL可以进行200次 (96孔板) 和400次 (384孔板) 反应，50mL可以进行1,000次 (96孔板) 和2,000 次 (384孔板)反应。
规格
荧光素检测液
还原酶
还原酶底物
10mL
10 mL
200 μL
50 μL
50mL
50 mL
1 mL
250 μL

操作步骤

试剂准备
UA-Glo® NAD(P)H 检测试剂按需新鲜配制，不建议保存配制好的检测试剂。检测时需要加入和酶学反应体积等体积的检测试剂，按此计算所需检测试剂体积。
1)取出UA-Glo®NAD(P)H检测试剂盒中的三组分
2)荧光素检测液室温融化后，可以保持在室温 (22-25°C) 直至使用(不超过24hr)，或保存于4°C一周。长期可分装保存于-20°C或更低温度，避免反复冻融
3)还原酶浓度为50x，融化后取所需体积（见步骤5）加入荧光素检测液中，剩余还原酶应分装保存-20°C或更低温度，避免反复冻融
4)还原酶底物浓度为200x，融化后取所需体积（见步骤5）加入荧光素检测液中，剩余还原酶底物应分装保存于-80°C，避免反复冻融
5)NAD(P)H检测试剂配制：还原酶浓度为50x，还原酶底物浓度为200x，按此比例将二者加入荧光素检测液中配制为NAD(P)H检测试剂，例如1mL荧光素检测液中加入20μL还原酶和5μL还原酶底物。颠倒试剂混匀。建议NAD(P)H检测试剂配制后立即使用。
NAD(P)H 检测
1)根据实验需求进行消耗或生成NAD(P)H)的酶学反应：
a)建议使用白色不透明实验板进行酶学反应，反应体积96孔板实验为50μL，384孔板实验为25μL，或其他适当酶学反应体积，检测时加入和酶学反应体积等体积的UA-Glo®NAD(P)H检测试剂即可
b)酶学反应中避免DTT等还原剂。还原剂可能和还原酶底物反应而增加检测背景
2)NAD(P)H 检测前应将实验板平衡至室温。荧光素酶反应对温度变化敏感。检测试剂和实验板需要平衡至室温，测试过程温度保持恒定 (±1℃)
3)实验板每孔加入酶学反应等体积UA-Glo®NAD(P)H检测试剂
4)中速振板30s，放置暗处孵育40-60min稳定发光信号
5)在发光或多功能读板仪上读取发光信号，可以在2-3hr内读板。发光信号约在60min达到峰值，信号半衰期>2hr。NAD(P)H检测试剂加入酶反应后会终止多数酶的反应，但是某些酶可以在检测试剂加入后继续反应，如果需要终止此类酶的反应以获得稳定的信号，可以在NAD(P)H检测试剂加入该酶的特异性抑制后再加入酶反应进行检测