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UA-Glo® cAMP Reagent

价格 ￥2,000.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 UA079040
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产品介绍

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背景介绍

  • UA-Glo® cAMP试剂适用于应用Promega GloSensor™ cAMP检测系统测定活细胞内cAMP浓度的变化，其检测性能和Promega GloSensor™ cAMP Reagent (Cat E1290, E1291) 相仿。

产品规格

  • 储存条件

    干冰运输。避光储存于-80℃。初次使用配制为UA-Glo® cAMP试剂母液后，按需分装避光储存于-80℃，避免反复冻融。

产品组分

  • UA-Glo® cAMP试剂组分和规格如下。可检测96-/384-孔板孔数根据标准实验条件下96-/384-孔板每孔分别加入100/20μL 平衡培养基计算。

    cAMP试剂

    HEPES缓冲液（10mM, pH7.5）

    检测96-孔板孔数

    检测384-孔板孔数

    25 mg

    1 mL

    400

    2,000

    250 mg

    10 mL

    4,000

    20,000


操作步骤

  • 根据Promega GloSensor™ cAMP检测系统说明书 (TM076) 设计和执行相关实验，以下为使用UA-Glo® cAMP试剂对贴壁细胞进行cAMP检测的实验步骤。

    1)配制UA-Glo® cAMP试剂母液：25mg UA-Glo® cAMP试剂 (L7101) 加入817μL 10mM HEPES 缓冲液(pH7.5)，或250mg UA-Glo® cAMP试剂 (L7102) 加入8.17mL HEPES 缓冲液(pH7.5)，充分混匀。按需分装避光储存于-80℃，避免反复冻融。此cAMP试剂母液可以按步骤3的50x稀释配制平衡培养基，也可根据具体实验优化平衡培养基cAMP试剂浓度以最大化信号和背景差异。

    2)无菌条件下按需现配平衡培养基：

    88% CO2独立培养基 (例如：Invitrogen Cat.#18045 )

    10% 胎牛血清

    2% UA-Glo® cAMP试剂母液

    3)取出96孔实验细胞板，例如表达Promega GloSensor™的细胞株或瞬转细胞，小心去除实验孔内的培养基后小心加入100μL步骤2配制的平衡培养基，室温(22-25℃)孵育2hr。具体孵育时间和温度可以优化，以背景信号达到平衡为准。注意检测过程全板的温度要保持一致

    4)根据实验设计加入测试化合物以及相应的对照，例如阳性对照可用10μM 毛喉素 (forsklin)，阴性对照为溶剂载体

    5)加入化合物15-30min后在发光或多功能读板仪上读取发光信号。具体时间可以请参考Promega GloSensor™ cAMP检测系统说明书 (TM076) 3.A节或根据具体实验进行优化

注意事项

  • 1)不同批次不建议混用

    2)非经严格验证，不建议改变检测试剂用量

    3)仅限科研用途

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