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UA-Glo® Firefly/Nano Dual Luciferase Assay System

Firefly/Nano双荧光素酶检测试剂盒

价格 1,350.00 1-2周
货号 UA079035
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背景介绍
  • 双荧光素酶报告基因在哺乳动物细胞功能的研究方面具有广泛的应用,包括细胞代谢,信号通路,转录因子,基因功能,药物筛选等。在双荧光素酶报告系统中,一个荧光素酶作为实验报告基因显示所研究靶标的活性;另一个荧光素酶作为对照报告基因,用于标化实验报告基因的活性,从而最大限度地减少因为转染效率、细胞数量、细胞裂解的效果、加样体积等导致的实验误差。

    UA-Glo® Firefly/Nano双荧光素酶检测试剂盒可以对同一样品检测萤火虫荧光素酶和微荧光素酶(Nano-Luc)的表达,具有灵敏度高、稳定性好、重复性好、使用便捷等优点。和传统的萤火虫/海肾荧光素酶双荧光素酶检测系统相比,UA-Glo® Firefly/Nano双荧光素酶检测试剂的信号值更高,灵敏度更高,并且更加耐受化合物对荧光素酶的作用,大大降低了高通量筛选中由于化合物对荧光素酶的影响而产生的假阳性结果。

产品规格
  • 分子别名

    Firefly/Nano双荧光素酶检测试剂盒
  • 储存条件

    三个月内放-20℃ 储存,三个月以上放-80℃ 储存。有效期12个月

产品组分
  • Firefly/Nano双荧光素酶检测试剂盒由R1试剂,R2缓冲液和R2底物组成。R1试剂灌装于棕色瓶中, R2缓冲液灌装于白瓶中,R2底物分装于微管中,具体规格如下:

    规格

    R1试剂

    R2缓冲液

    R2底物

    可检测的 96-孔板孔数

    可检测的 384-孔板孔数

    10 ml

    10 ml

    10 ml

    100μl

    200

    1,000

    100 ml

    100 ml

    100 ml

    1ml

    2,000

    10,000

    10x100 ml

    10x100 ml

    10x100 ml

    10x1ml

    2,000

    100,000


操作步骤
  • 1.在96孔或384孔白色细胞培养板铺合适密度的细胞,根据实验需要转染表达萤火虫荧光素酶和微荧光素酶(Nano-Luc)的载体,或直接使用可表达该双荧光素酶的稳定细胞株。

    2.根据实验需求对细胞进行相关处理,并培养合适的时间。

    3.取出实验细胞板,平衡至室温(22-25℃)【注1】。

    4.取出检测试剂,平衡至室温。R1试剂可以直接使用。R2底物为100x 浓缩液,使用前用R2缓冲液配成R2 1x工作液 【注2】。

    5.入与实验细胞板中细胞培养液等体积R1试剂到实验细胞板中,例如50µl R1 加入到含有50µl 细胞培养液的96孔实验细胞板【注3】。

    6. 板3分钟,放置暗处继续裂解5分钟。

    7.荧光读板仪上读取荧光信号,此为萤火虫荧光素酶活性读数【注4】

    8.向上述实验细胞板孔中加入与R1试剂等体积的R2工作液。

    9.板3分钟充分混匀,放置暗处继续裂解10分钟。

    10.luminescence 读板仪上读取荧光信号, 此为微荧光素酶(Nano-Luc)活性读数。

    11.根据实验需要进行数据处理 【注5】

注意事项
  • 1.荧光素酶反应对温度敏感,试剂和实验细胞板应平衡至室温(22-25℃),检测过程中应保持恒温(±1℃)。

    2.R2工作液根据需要现配。初次使用后分装R1试剂和R2底物于-20℃或更低温度保存。不同批次的试剂不建议混合使用。

    3.细胞培养液,R1和R2试剂的体积比为1:1:1。非经验证,不建议改变检测试剂比例。

    4.建议在加入R1或R2试剂 1小时内完成读板以获得最佳结果。

    5.实验板间的数据比较需要在所有实验板设立适当对照样品作为板间内参。对每块板的实验数据用板间内参归一(Normalization)后再进行比较,并且每块实验板加入R1和R2试剂后的读数时间应保持一致,以保证实验板间同等的信号衰变速率。

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