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UA-Blue SEAP Detection Kit

Alkaline phosphatase detection reagent(分泌型碱性磷酸酶检测试剂盒)

价格 ￥720.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 UA079029
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产品介绍

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背景介绍

  • 分泌型碱性磷酸酶（SEAP）被广泛应用于报告基因分析研究。其优势是只需要采取细胞培养上清液分析即可，不需要裂解细胞。同时，SEAP比较耐高温处理，也对一些特异性的碱性磷酸酶抑制剂耐受度比较高，如此，样本可以进行特定的预处理，灭活掉内源性的碱性磷酸酶以排除干扰。

    UA-Blue分泌型碱性磷酸酶检测试剂盒为均质即用型（Homogeneous ready for use）试剂，通过“加入-混合-检测”简单步骤完成检测。该试剂盒用于检测带分泌型碱性磷酸酶报告基因转染的细胞的培养液中的碱性磷酸酶酶活性，不需要裂解细胞，细胞可以继续培养或用于其它多重分析。相对于国外品牌同类产品检测灵敏度高至少1倍以上，同时反应时间缩短至少1倍以上，尤其适合于低酶活性细胞分析及抑制性化合物的筛查。

产品规格

  • 分子别名

    Alkaline phosphatase detection reagent(分泌型碱性磷酸酶检测试剂盒)

  • 储存条件

    干冰运输。-20℃及以下避光储存，有效期见试剂瓶标签。

产品组分

  • Size

    Buffer (40x)

    Substrate (250x)

    Tests in 96-well plates

    Tests in 384-well plates

    500 tests

    2.5 ml

    400 μl

    500

    2,500

    2500 tests

    5x 2.5 ml

    5x 400μl

    2,500

    12,500

    25000 tests

    5x 25 ml

    5 x 4ml

    25,000

    125,000


操作步骤

  • 1.根据实验设计，将表达SEAP报告基因的细胞铺于96孔或384孔反应板。如细胞培养基中含有FBS，应以56℃，30分钟处理FBS以灭活FBS中可能含有的碱性磷酸酶

    2.根据实验要求对细胞进行化合物处理及报告基因刺激

    3.报告基因刺激后适当时间，收集细胞上清液，进行SEAP活性检测。QT-BlueTM 分泌型碱性磷酸酶检测试剂可以抑制适量的内源性碱性磷酸酶的活性而不影响SEAP的活性。如果表达SEAP的细胞有较高的内源性碱性磷酸酶分泌，可以对检测样本进行65℃，5-10min孵育灭活内源性碱性磷酸酶后再进行SEAP检测

    4.实验前将QT-BlueTM 分泌型碱性磷酸酶检测试剂平衡至室温

    5.QB 缓冲液（40x ）可能呈现微浊状，无沉淀，可振荡混匀后稀释使用。QB 缓冲液（40x）可保存于4℃ 2周或-20℃长期保存

    6.QB底物（250x）溶液颜色为红褐色。底物（250x）长期保存于4℃或-20℃时底物会有析出，可剧烈振荡1-2min，沉淀溶解。也可37℃ ，5-10min助溶。QB底物（250x）可保存于4℃ 4周或-20℃ 长期保存

    7.根据实验需要配制所需体积的1x反应液。试剂盒中的底物为250x，缓冲液为40x，使用前用无菌纯水将缓冲液配成1x缓冲液，再用1x缓冲液将底物稀释成1x反应液。具体配制过程请严格按以下步骤执行：

    以配制40mL 1x检测试剂（1x 缓冲液，1x底物）为例。先将1mL QB缓冲液（40x）加到39mL无菌纯水中混匀(1x QB缓冲液), 再加入167μL QB底物（250x）：底物加入后会立即形成絮状, 需要立刻振荡至底物完全溶解，此为1x检测试剂，该试剂为澄清溶液。如果底物加入后未立即振荡至底物完全溶解将会形成沉淀且不易再溶解。

    HTS实验高浓度检测试剂配制：HTS实验可以不进行移液操作而直接将高浓度检测试剂加入细胞培养板中进行检测。以1536-孔细胞板为例，细胞培养液为4μl/孔, 可以按以上配制3X检测试剂（3x 缓冲液，3X底物），加2μL 3X检测试剂到4μL细胞培养液中，检测试剂终浓度为1x. 为了提高检测信号值，也可配制更高浓度例如6X的检测试剂，按上述1；2的检测试剂和细胞培养液比例加入细胞培养板中进行检测。

    1x检测试剂（或更高浓度3x, 6x）可保存于4℃ 1周。长期保存于4℃ 的检测试剂会有少量沉淀，振荡混匀后沉淀溶解，不影响使用。

    8.96-孔透明检测板每孔加入20 μl检测样本或对照样本，再向各孔加入180 μl 1X检测试剂，振板15s混匀

    9.37℃孵育，30min-6hr 内读板

    10.多功能读板仪上以波长620nm读取吸光度OD值。其他波长位于600-650nm之间也可读板

注意事项

  • 1.不同批次不建议混用

    2.非经严格验证，不建议改变检测试剂用量

    3.仅限科研用途

  • 生物活性

    • SEAP检测试剂盒反应动力学： 5x10^5/ml的THP1-Dual细胞接种于12孔细胞培养板中，加3mg/ml终浓度的Pam3CSK4 刺激24小时后收集上清液进行酶活性分析。按试剂盒说明书进行检测，180ml 检测试剂加20 ml上清液，混匀后在不同时间检测吸光度。图中样本是刺激后的上清液未稀释直接检测的结果，代表两个重复的平均值，检测波长是650nm。

    • 信号窗口和稳定性对比

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