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UA-Glo® Nano-Steady Luciferase Assay System

Nano-Steady 荧光素酶检测试剂盒

价格 900.00 供应商现货 : 3-5个工作日
货号 UA079013
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背景介绍
  • 荧光素酶报告基因系统被广泛应用于细胞内信号通路、转录因子调节、受体功能研究、高通量药物筛选等。细胞内荧光素酶的表达能够进行定量检测,其工作原理是荧光素酶催化相应的底物而产生发光,发光的强度与荧光素酶的量呈正比。相对于传统的萤火虫或海肾荧光素酶报告基因,微荧光素酶(NanoLuc®)作为报告基因其蛋白分子量更小,更不容易受筛选化合物的非特异性影响,同时微荧光素酶催化的反应发光更强,因此检测灵敏度也有明显提高。

    优爱生物的UA-Glo® 稳定型微荧光素酶检测试剂盒包括裂解缓冲液和专有的微荧光素底物。试剂盒为均质即用型试剂,一次加样可以同时进行细胞裂解和微荧光素酶检测,减少了多次加样可能导致的实验误差。UA-Glo® 稳定型微荧光素酶检测试剂盒具有信噪比高、重复性好、稳定性好的特点,尤其适合化合物的高通量筛选实验。

产品规格
  • 分子别名

    Nano-Steady 荧光素酶检测试剂盒
  • 储存条件

    干冰运输。-20℃及以下避光储存,有效期见试剂瓶标签。初次使用后建议将试剂按需分装避光-20℃及以下保存。长期保存(>2个月),底物建议-80℃保存。

产品组分
  • UA-Glo® 稳定型微荧光素酶检测试剂盒组分和规格如下。可检测的96-孔和384-孔板反应数按照每孔样品分别为100 μL20 μL,每孔分别加入100 μL20 μL检测试剂计算。

    规格

    裂解缓冲液

    微荧光素酶底物

    检测96-孔板孔数

    检测384-孔板孔数

    10 mL

    10 mL

    50 μL

    100

    500

    100 mL

    100 mL

    0.5 mL

    1,000

    5,000

    10*10 mL

    10 x 10 mL

    10 x 50 μL

    1,000

    5,000

    10*100 mL

    10 x 100 mL

    10 x 0.5 mL

    10,000

    50,000


操作步骤
  • 荧光素酶反应有极高的灵敏度,并且pH,温度,实验系统设定等参数对反应均有较大影响,多数实验条件下不建议直接比较样品绝对检测值。建议在每块实验板设定同样的参照化合物和溶剂载体对照,实验样品检测值用参照化合物和溶剂载体对照检测值归一化后再进行数据处理和比较。

    以下实验以检测细胞内微荧光素酶的表达为例。UA-Glo® 稳定型微荧光素酶检测试剂盒也可以用来检测分泌到细胞外的分泌型微荧光素酶的表达。由于微荧光素酶在培养基中非常稳定,因此可以对分泌型微荧光素酶进行连续检测,例如每次可以取5-20 μL含有分泌型微荧光素酶的培养基加入白色实验板,用无菌超纯水稀释到100 μL后按以下步骤4-8进行检测。

    1.96孔或384孔白色透明细胞培养板接种合适密度的表达微荧光素酶报告基因的细胞

    2.根据实验需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间至检测

    3.取出待测细胞培养板,平衡至室温 (22-25)。荧光素酶反应对温度变化敏感。检测试剂和实验细胞板需要平衡至室温,测试过程温度保持恒定 (±1)

    4.取出裂解缓冲液,完全融化后平衡至室温,颠倒充分混匀

    5.取出微荧光素酶底物,快速离心将内容物收集于管底,放置在冰上

    6.配制微荧光素酶检测试剂:根据实验需求确定配制的试剂量,配制时将微荧光素酶底物按200x加到裂解缓冲液中,充分混匀即为微荧光素酶检测试剂

    7.实验细胞板每孔加入与孔内培养基等体积的微荧光素酶检测试剂,例如100 μL培养基加入100 μL微荧光素酶检测试剂,振板1min混匀,放置暗处3-10min

    8.在发光或多功能读板仪上读取发光信号,信号的半衰期 > 2hr。微荧光素酶极高表达的情况下会加速底物的消耗导致信号半衰期降低

注意事项
  • 1.不同批次不建议混用

    2.非经严格验证,不建议改变检测试剂用量

    3.仅限科研用途

    4.NanoLuc是Promega公司注册商标

  • 生物活性

    • Nano-Steady 荧光素酶检测试剂盒信号稳定性测试: 6x10^5/ml的HEK293 细胞接种于 6 孔细胞培养板中;24 小时后转染含 Nano 荧光素酶报告基因的质粒;转染后 48 小 时,将细胞转到 96 孔板中, 15000 cells/孔,细胞贴壁后,取出细胞在室温平衡 10 分钟,然后加入平衡至室温的 Nano-Steady 荧光素酶检测试剂,在不同时间点连续读取荧光值。

    • HEK293 细胞转染含 Nano 荧光素酶报告基因的质粒。转染后 48 小时,将细胞转到 96 孔板中,15000 cells/孔,每孔细胞数如表中所示,然后加入平衡至室温的 Nano-Steady 荧光素酶检测试剂检测,无细胞的培养液为空白对照。表中读数为检测20 分钟时每 2 个重复孔的平均值。

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