UA-Glo^® Caspase 3/7 Assay

Caspase3/7细胞凋亡检测试剂盒

Datasheet COA

价格￥490.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 UA079012

规格

2.5ml10ml10*10ml100ml

数量

产品介绍

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背景介绍

UA-Glo® Caspases 3/7 细胞凋亡检测试剂盒用于定量检测细胞中Caspases 3和7的活性。将该试剂加入待测细胞后，细胞裂解释出的Caspases 3/7切割试剂中的Caspases 3/7特异性的多肽荧光素偶联底物从而释出荧光素，试剂中的荧光素酶可以催化荧光素反应而产生光，光的强度和Caspases 3/7的活性成正比关系。该试剂具有信噪比高、重复性好、稳定性好的特点。均质即用型的配方减少了实验准备和操作步骤，降低了因为多次加样导致的误差，且其稳定的辉光信号使该产品尤其适合高通量的化合物筛选。

产品规格

分子别名

Caspase3/7细胞凋亡检测试剂盒
储存条件

干冰运输。-20℃及以下避光储存。长期保存(>3个月)建议-80℃保存。初次使用后试剂按需分装并保存于-20℃及以下，避免反复冻融。有效期见试剂瓶标签。

产品组分

UA-Glo® Caspases 3/7 细胞凋亡检测试剂盒规格如下。可检测96-/384-孔板反应数按每孔加入100μL / 20μL检测试剂计算。
规格
检测96-孔板反应数
检测 384-孔板反应数
2.5 mL
25
125
10 mL
100
500
100 mL
1,000
5,000
10x10 mL
1,000
5,000

操作步骤

1. 细胞准备
1) 在96孔或384孔白色细胞培养板铺合适密度的细胞
2) 根据实验设定，细胞孵育一定时间后将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。建议设置只加溶剂载体的细胞对照(阴性对照)和只加溶剂载体的细胞培养基对照(空白对照)。空白对照是对细胞培养系统和UA-Glo® Caspase 3/7检测试剂相关的背景荧光的测量，可以选择从检测值中减去空白对照后再进行相应的计算。细胞阴性对照反映了待测细胞的基础Caspase 3/7活性，可作为实验结果解释的参考
3) 根据实验需求继续培养合适的时间诱导细胞凋亡

2. UA-Glo® Caspases 3/7 细胞凋亡检测
1) 取出UA-Glo® Caspases 3/7 细胞凋亡检测试剂，室温(22℃-25℃)完全融化后进一步平衡至室温，颠倒充分混匀。取实验所需检测试剂，剩余试剂按需分装并保存于-20℃及以下
2) 取出待测细胞培养板，平衡至室温。荧光素酶反应对温度变化敏感。试剂和测试样品需要平衡到室温，测试过程温度保持恒定(±1℃)
3) 向细胞培养板加入与孔内培养基等体积的检测试剂，例如100μL培养基加入100μL检测试剂
4) 中速振板1min，放置暗处室温孵育10-60min
5) 在发光或多功能读板仪上读取发光信号。信号一般在加入检测试剂1h左右达到最大值。最早可以在加入检测试剂后30min读板, 最晚不要超过2-3hr。最佳检测时间段与细胞和实验设定有关，需根据不同实验优化

注意事项

1. 不同批次不建议混用
2. 非经严格验证，不建议改变检测试剂用量
3. 仅限科研用途

生物活性
- Caspases3/7细胞凋亡检测试剂检测化合物Staurosporine(STSP)对HeLa细胞凋亡的作用：4x105/ml 的HeLa细胞接种于96孔白板透明底培养板，100µl/孔。24小时后加入3倍稀释的STSP，37℃5%CO2孵育6hr后按照Caspases3/7细胞凋亡检测试剂的说明进行Caspases3/7活性检测。图1示加入检测试剂后30min-130min读取荧光值的剂量曲线，表格为计算所得的EC50值。
- Caspases3/7细胞凋亡检测灵敏度测试：1μMSTSP处理HeLa细胞6hr后，两倍系列稀释的STSP处理的HeLa细胞接种于96孔透明底白板，100µl/孔；细胞浓度为25，000-180cell/well。按照Caspases3/7 细胞凋亡检测试剂的说明进行Caspases3/7活性检测。左图示在检测的40min-70min，荧光信号和细胞凋亡数成线性相关（R2>0.99），可以检测低至200个凋亡细胞。右图示1μMSTSP和溶剂DMSO处理HeLa细胞6hr后进行Caspases3/7活性检测(70min荧光检测数值)。
- 细胞数量灵敏度测试