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产品中心 酶制剂 试剂盒

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StartScript® One Step RT-PCR Kit

价格 ￥450.00 （ 1-2周）
货号 UA070126
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产品介绍

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产品规格

  • 储存条件

    Store at -25 ~ -15℃ for 2 years

产品组分

  • Component

    UA070126-50 Rxns

    UA070126-250 Rxns

    One-Step Enzyme Mix (25X)

    100 μl

    5 × 100 μl

    One-Step Reaction Mix (2X)

    2 × 625 μl

    10 × 625 μl

    RNase Free dH2O

    2 × 1 ml

    10 × 1 ml


操作步骤

  • 1. 在Rnase-free离心管中配制如下混合液：

    Component

    Volume

    One-Step Enzyme Mix (25X)

    2 μl

    One-Step Reaction Mix (2X)

    25 μl

    Gene-specific Forward Primer (10 μM)

    2 μl

    Gene-specific Reverse Primer (10 μM)

    2 μl

    Template RNA (1 pg~1 μg)

    x μl

    Rnase Free dH2O

    Up to 50 μl

    用移液器轻轻吹打混匀。
    2. 按下列条件进行RT-PCR反应

    Step

    Temperature

    Time

    Number of Cycles

    Reverse Transcription*

    48°C

    30 minutes

    1 cycle

    Initial Denaturation

    94°C

    3 minutes

    1 cycle

    Denaturation

    Annealing**

    Extension

    94°C

    50-65°C

    72°C

    30 seconds

    30 seconds

    1 minutes

    25–35 cycles

    Final Extension

    72°C

    5 minutes

    1 cycle

    Soak

    4°C

    Indefinite

    1 cycle


    *如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可将反应温度提高至55℃，有助于提高产量。
    **退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1 ~ 2℃即可。

注意事项

  • 1. 使用DEPC处理研究中使用的所有设备，或购买经证明无核酸的设备。在研究过程中戴上手套，并经常更换，以避免RNA酶污染。

    2. 确保所用试剂中没有RNA酶污染。

    3. 通常情况，28～30个循环可达到最佳扩增，对于低拷贝目的基因的检测，可将循环数增加到40个。

    4. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物，Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。

    5. 实验操作时应将酶制品放在冰上，实验结束后立即保存在 -20°C。


  • 生物活性

    • 使用不同量的HEK293T总RNA为模板，检测β-actin基因197bp的DNA片段。在50μl反应体系中加入指定量的本产品或T公司(Competitor) 的类似产品进行RT-PCR扩增后的电泳效果图。如图所示，本产品与T公司的产品相比，具有较一致的检测灵敏度，对RNA的敏感检测低至1 pg，且具有更好的专一性和扩增效率。
      M: DL2000 DNA Marker；
      CK: 未添加Enzyme Mix；
      Lane 1: 1ug；
      Lane 2: 100ng；
      Lane 3: 10ng；
      Lane 4: 1 ng；
      Lane 5: 100pg；
      Lane 6: 10pg；
      Lane 7: 1pg；
      Lane 8: 0.1 pg；

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