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产品中心 酶制剂 试剂盒

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Poly(A) Polymerase Tailing Kit

价格 ￥2,500.00 （ 1-2周）
货号 UA070116
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产品介绍

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产品规格

  • 储存条件

    Store at -25 ~ -15℃ for 2 years

产品组分

  • 组分

    UA070116-50 Rxns

    UA070116-250 Rxns

    E. coli Poly(A) Polymerase

    (5 U/µl)

    100 μl

    5 × 100 μl

    10 X PAP Reaction Buffer

    300 μl

    5 × 300 μl

    10 mM ATP

    300 μl

    5 × 300 μl

    RNase Free dH2O

    1 ml

    5 × 1 ml


操作步骤

  • 1. 参考下表在冰浴中配制如下反应体系：

    Component

    Volume

    Final Concentration

    10 X PAP Reaction Buffer

    5 μl

    1 X

    RNase Inhibitor (40U/μl)

    1.25 μl

    1 U/μl (Optional)

    E.coli Poly(A) Polymerase

    (5 U/μl)

    2 μl

    0.2 U/μl

    10 mM ATP

    5 μl

    1 mM

    RNase Free dH2O

    Up to 50 μl

    -

    用移液器轻轻吹打，充分混匀。
    2. 加尾反应：37ºC孵育30 ~ 60 min。
    3. 反应终止：反应完成后立即-20ºC保存，或加入EDTA至终浓度为10mM，或者使用苯酚/氯仿抽提并使用铵盐/乙醇沉淀RNA。

注意事项

  • 1. 由于涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。

    2. 用于加尾反应的RNA在使用前应进行适当的纯化，并溶解于RNase Free dH2O中，且溶液中应不含EDTA和盐分。

    3. 如果较难确保比较严格的RNase-free，推荐在上述反应体系中添加适量的RNase Inhibitor，以提高溶液中RNA的稳定性。

    4. 实验操作时应将酶制品全程放在冰上，实验结束后立即保存在-20°C。

  • 生物活性

    • Poly(A) Polymerase Tailing Kit对单链RNA添加Poly(A)尾的效果图。在50μl反应体系中，加入5 μg 541nt的单链RNA，以及图中指定量的Poly(A) Polymerase，37ºC孵育30 min，65ºC孵育20min终止反应。以下为琼脂糖凝胶电泳检测效果图。
      Lane 1阴性对照（未加Poly(A) Polymerase）；
      Lane 2 0.008 U PAP；
      Lane 3 0.04 U PAP；
      Lane 4 0.2 U PAP；
      Lane 5 1 U PAP；
      Lane 6 5 U PAP；
      Lane 7 10 U PAP；

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