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UA-Glo® Nano luciferase Live Cell Assay System

价格 690.00 供应商现货 : 3-5个工作日
货号 UA070110
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背景介绍
  • 微分裂荧光素酶技术(Nanoluc Split Enzyme Technology)将微荧光素酶(NanoLuc)分成两个不同的片段:大片段和小片段,两个片段单独不具有酶活性,而大小片段结合后恢复微荧光素酶活性。大小两个片段可以具有高亲和力或低亲和力不同组合。高亲和力大小片段在同一反应体系中可以快速结合为具有酶活性的微荧光素酶,而低亲和力大小片段可以借助其标记的两个目标蛋白的结合而成为具有酶活性的微荧光素酶。检测微荧光素酶大小片段结合所致的微荧光素酶活性可以用于细胞蛋白的表达,调控和降解以及蛋白相互作用等领域的研究。

    UA-Glo微荧光素酶活细胞内检测试剂盒包括优爱生物专有的可以进入细胞的微荧光素酶底物和缓冲液,可以不裂解细胞检测活细胞内微荧光素酶大小片段结合后产生的微荧光素酶活性,也可以检测微荧光素酶在活细胞中的表达。该试剂盒具有检测灵敏度高,背景低,检测范围广,检测信号稳定(半衰期约2hr)的优点,特别适合化合物的高通量筛选。

产品规格
  • 储存条件

    干冰运输。-20℃及以下温度避光储存,有效期12个月。长期保存(>2个月),底物建议-80℃保存。底物初次使用后应分装并保存于-20℃及以下温度。


产品组分
  • 规格

    缓冲液

    微荧光素酶底物

    检测96-孔板孔数

    检测384-孔板孔数

    10 ml

    10 ml

    50μl

    200

    1,000

    100 ml

    100 ml

    0.5ml

    2,000

    10,000

    10X100 ml

    10X100 ml

    10X0.5ml

    20,000

    100,000

操作步骤
    1. 96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的实验细胞,细胞可以是分别表达带有微荧光素酶大小片段标签的两个目标蛋白的瞬转细胞,稳定细胞株或内源性表达细胞系。建议使用白色透明底细胞板。

    2. 根据实验需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间。

    3. 取出检测缓冲液,平衡至室温(22-25℃)。荧光素酶反应对温度变化敏感。试剂和实验板需要平衡到室温,测试过程温度保持恒定(±1℃)

    4. 离心微荧光素酶底物管将内容物收集于管底,置于冰上。

    5. 取出实验细胞培养板,平衡至室温。

    6. 根据实验需求确定检测试剂用量,建议96孔板每孔加入50 µL检测试剂, 384孔板每孔加入10 µL检测试剂。

    7. 配制检测试剂:微荧光素酶底物为200x,使用前用缓冲液稀释成1x的检测试剂,充分混匀。注意避光。

    8. 根据实验需要可以选择以下检测方法:

      1. 弃去实验细胞板培养液后96孔板每孔直接加入50µL检测试剂(384孔板加入10µL),此方法提供最高的信号强度和最低的检测背景。

      2. 弃去实验细胞板培养液后96孔板每孔加入100µL 的无血清培养基,例如Opti-MEM (384孔板加入20µL), 加入50µL检测试剂(384孔板加入10µL),此方法有利于保持更好的细胞状态 。

      3. 不弃去实验细胞板培养液,96孔板直接加入50µL检测试剂(384孔板加入10µL):此方法适合HTS实验。培养基内的FBS会影响信号强度和提高检测背景,可以用低浓度血清例如2% FBS接种实验细胞以减小FBS的影响。具体适合的FBS浓度可能需要优化。

    9. a检测方法直接暗处放置10min bc检测方法轻轻振板混匀,暗处放置10min

    10. 多功能读板仪上读取发光信号。

注意事项
  • 1. 本产品仅作科研用途。

    2. 不同批次的试剂不建议混合使用。

    3. 非经严格验证,不建议改变检测试剂用量。

    4. 按照说明书分装储存检测试剂,保证试剂的稳定性。


  • 生物活性

    • 活细胞微分裂荧光素酶活性检测: HEK293 细胞接种于 96 孔白板透明底培养板,100µl/孔,细胞密度为 60-70%。共转染带分裂酶大片段及小片段标签的目标分子表达质粒,每孔 0.2µg DNA,48 小时后检测 Nanoluc 荧光素酶活性,动态读板2 小时

    • 检测灵敏度分析: HEK293 细胞接种于 6 孔培养板,细胞密度为 60-70%。共转染带分裂酶大片段及小片段标签的目标分子表达质粒,每孔 0.2µg DNA,48 小时后酶消化细胞,计数,按表中列出的细胞数目分于 96 孔反应板,离心去上清,加检测试剂检测 Nanoluc 荧光素酶活性,最后一组为无细胞对照。表中读数为 2 个重复孔的平均值。

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