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微分裂荧光素酶技术(Nanoluc Split Enzyme Technology)将微荧光素酶(NanoLuc)分成两个不同的片段:大片段和小片段,两个片段单独不具有酶活性,而大小片段结合后恢复微荧光素酶活性。大小两个片段可以具有高亲和力或低亲和力不同组合。高亲和力大小片段在同一反应体系中可以快速结合为具有酶活性的微荧光素酶,而低亲和力大小片段可以借助其标记的两个目标蛋白的结合而成为具有酶活性的微荧光素酶。检测微荧光素酶大小片段结合所致的微荧光素酶活性可以用于细胞蛋白的表达,调控和降解以及蛋白相互作用等领域的研究。
UA-Glo微荧光素酶活细胞内检测试剂盒包括优爱生物专有的可以进入细胞的微荧光素酶底物和缓冲液,可以不裂解细胞检测活细胞内微荧光素酶大小片段结合后产生的微荧光素酶活性,也可以检测微荧光素酶在活细胞中的表达。该试剂盒具有检测灵敏度高,背景低,检测范围广,检测信号稳定(半衰期约2hr)的优点,特别适合化合物的高通量筛选。
储存条件
干冰运输。-20℃及以下温度避光储存,有效期12个月。长期保存(>2个月),底物建议-80℃保存。底物初次使用后应分装并保存于-20℃及以下温度。
规格
缓冲液
微荧光素酶底物
检测96-孔板孔数
检测384-孔板孔数
10 ml
10 ml
50μl
200
1,000
100 ml
100 ml
0.5ml
2,000
10,000
10X100 ml
10X100 ml
10X0.5ml
20,000
100,000
1. 本产品仅作科研用途。
2. 不同批次的试剂不建议混合使用。
3. 非经严格验证,不建议改变检测试剂用量。
4. 按照说明书分装储存检测试剂,保证试剂的稳定性。
生物活性
活细胞微分裂荧光素酶活性检测: HEK293 细胞接种于 96 孔白板透明底培养板,100µl/孔,细胞密度为 60-70%。共转染带分裂酶大片段及小片段标签的目标分子表达质粒,每孔 0.2µg DNA,48 小时后检测 Nanoluc 荧光素酶活性,动态读板2 小时
检测灵敏度分析: HEK293 细胞接种于 6 孔培养板,细胞密度为 60-70%。共转染带分裂酶大片段及小片段标签的目标分子表达质粒,每孔 0.2µg DNA,48 小时后酶消化细胞,计数,按表中列出的细胞数目分于 96 孔反应板,离心去上清,加检测试剂检测 Nanoluc 荧光素酶活性,最后一组为无细胞对照。表中读数为 2 个重复孔的平均值。







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