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UA-Glo® Nano luciferase split Extracellular Assay System

微分裂荧光素酶细胞外检测试剂盒

价格 860.00 供应商现货 : 3-5个工作日
货号 UA070109
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背景介绍
  • 微分裂荧光素酶技术(Nano luciferase split enzyme technology)将荧光素酶蛋白分子分成两个不同的片段,分别表达,两个片段具有高亲和力,在同一反应体系中可以快速自动生成具有荧光素酶活性的完整的酶分子。检测微分裂荧光素酶活性可以用于细胞内目标蛋白的表达水平,相互作用,动态变化等研究。
    微分裂荧光素酶细胞外检测试剂盒提供细胞非裂解缓冲液,反应底物,而反应体系的分裂荧光素酶小片段则克隆在表达载体上,并与目标蛋白表达在同一分子上,作为目标蛋白分子的标签,该目标蛋白是分泌型的或存在于细胞膜胞外。带分裂荧光素酶小片段标签的目标蛋白表达载体由用户构建,制备,并完成对细胞的转染。

产品规格
  • 分子别名

    微分裂荧光素酶细胞外检测试剂盒
  • 储存条件

    干冰运输。-20℃及以下避光储存,有效期12个月。长期保存,底物建议-80℃保存。底物初次使用后应分装并保存于-20℃及以下,避免冻融次数超过3次以上。

产品组分

  • 缓冲液,底物分别混灌装于 10 ml 或 100 ml 的棕色瓶及 2ml 的螺旋管中,规格如下:

    缓冲液

    底物

    检测的 96-孔板

    孔数

    检测的 384-孔板

    孔数

    10 ml

    50ml

    100

    500

    100 ml

    0.5ml

    1,000

    5,000

    10X100 ml

    10X0.5ml

    10,000

    50,000


操作步骤
    1. 96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞。待检测细胞可以是表达带有分裂荧光素酶小片段标签的目标蛋白的瞬转细胞,稳定细胞株或内源性表达细胞系。建议使用白板。

    2. 根据项目需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间。

    3. 取出检测缓冲液,平衡至室温。离心底物管10秒钟,将内容物收集于管底,放置在冰盒上。

    4. 取出待测细胞培养板,平衡至室温。

    5. 准备1x的检测工作液:根据实验需求确定配制的试剂量。配制时将需要的底物及分裂酶大片段(用户自供,最佳浓度需优化)按比例加到缓冲液中,充分混匀。试剂盒中底物是200x,建议配制分裂酶大片段浓度为100x,使用前用缓冲液稀释成1x的检测工作液。注意避光。

    6. 向待检反应孔里加入等体积的1x的检测工作液,例如100μL培养基加入100μL 1x检测工作液,振板3min,放置暗处继续裂解10分钟。

    7. 在荧光读板仪上读取荧光信号。保存数据,进行数据处理分析。

注意事项
  • 1. 试剂量:非经严格验证,不建议随意改变反应试剂用量。

    2. 不同批次的试剂不建议混合使用。

    3. 分装储存:按照说明书分装储存反应试剂,保证试剂的稳定性。


  • 生物活性

    • UA-Glo 微分裂荧光素酶细胞外检测试剂灵敏度实验
      HEK293细胞接种于6孔培养板,细胞密度为80-90%。转染带分泌型分裂酶小片段标签的目标分子表达质粒,转染24hr后将细胞重悬于DMEM(10%FBS)培养基,加细胞到 96孔白框透明细胞板中, 1250 细胞/孔,每孔50μL。24hr后取出细胞板进行测试:加入平衡至室温的UA-Glo微分裂荧光素酶细胞外检测试剂,10min检测,读值和S/B (转染细胞和DMEM(10%FBS)比值)

    • UA-Glo微分裂荧光素酶细胞外检测试剂稳定性测试:
      HEK293细胞接种于6孔培养板,细胞密度为80-90%。转染带分泌型分裂酶小片段标签的目标分子表达质粒,转染24hr后将细胞重悬于DMEM(10%FBS)培养基,加细胞到 96孔白框透明细胞板中, 1250 细胞/孔,每孔50μL。24hr后取出细胞板进行测试:加入平衡至室温的检测试剂,在10min-60min进行检测,以10min读值为100% 的信号进行稳定性作图
      UA-Glo 微分裂荧光素酶细胞外检测试剂信号半衰期>2hr。

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