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UA-Glo® Nano luciferase Lytic Detection System

微分裂荧光素酶裂解型检测试剂盒

价格 1,080.00 供应商现货 : 3-5个工作日
货号 UA070108
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背景介绍
  • 微分裂荧光素酶技术 (Nano-luc Split Enzyme Technology) 将微荧光素酶 (NanoLuc® Luciferase) 分成具有高亲和力的两个片段 :大片段和小片段。微荧光素酶小片段以目标蛋白标签的形式表达,在同一反应体系中可以和微荧光素酶大片段快速结合为具有微荧光素酶活性的完整的酶分子。检测微荧光素酶大片段和小片段结合所致的微荧光素酶活性可以用于细胞内蛋白的表达,调控和降解以及蛋白相互作用等领域的研究。

    优爱生物微分裂荧光素酶裂解型检测试剂盒(Nano-luc Lytic Detection System)包括专有的细胞裂解液和微荧光素酶底物。该试剂盒具有检测灵敏度高,背景低,检测范围广,检测信号稳定(半衰期约3hr)的优点,特别适合化合物的高通量筛选。

产品规格
  • 分子别名

    微分裂荧光素酶裂解型检测试剂盒
  • 储存条件

    干冰运输。-20℃及以下避光储存,有效期12个月。长期保存(>4周),底物建议-80℃保存。底物初次使用后应分装并保存于-20℃及以下。检测试剂建议按需新鲜配制,剩余的检测试剂可以-20℃或-80℃保存。


产品组分
  • 规格

    细胞裂解液

    微荧光素酶底物

    96-孔板检测孔数

    384-孔板检测孔数

    10 ml

    10 ml

    50μl

    100

    500

    100 ml

    100 ml

    0.5ml

    1,000

    5,000

    10*100 ml

    10X100 ml

    10X0.5 ml

    10,000

    50,000



操作步骤
  • 客户根据实验需要构建具有微荧光素酶小片段标签的目标蛋白表达载体和表达此目标蛋白的细胞,包括瞬转或稳转外源性表达以及通过例如CRISPR-Cas9 Knock-IN 技术构建的内源性表达细胞系。微荧光素酶大片段由客户自己提供。

    在白色透明96孔或384孔细胞板接种合适密度的细胞,转染表达具有微荧光素酶小片段标签的目标蛋白质粒或直接接种表达目标蛋白的稳定细胞株。

    1. 根据实验需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间。

    2. 取出细胞裂解液,平衡至室温(22-25℃)。检测试剂中的荧光素酶反应对温度变化敏感。试剂和测试样品/实验板需要平衡到室温(22-25℃),测试过程温度保持恒定(±1℃)。

    3. 取出底物及微荧光素酶大片段(客户自己提供),快速离心10 sec,将内容物收集于管底,放置于冰上。

    4. 取出实验细胞板,平衡至室温。

    5. 检测试剂制备:根据实验需求确定所需检测试剂的数量。配制时先将底物按200x加到细胞裂解液中,充分混匀,再加入微荧光素酶大片段(客户自供)。微荧光素酶大片段浓度需优化,其工作浓度对目标蛋白浓度为过饱和,建议配制的浓度为100x,使用前用上述加有1x底物的细胞裂解液稀释为1x,充分混匀。

    6. 实验细胞板中每孔加入与培养基等体积的检测试剂,例如每孔100μL的培养基加入100μL 的检测试剂,振板3min,放置暗处继续裂解10min

    7. 多功能读板仪上读取发光信号。

注意事项
  • 1. 本产品仅作科研用途。

    2. 不同批次的试剂不建议混合使用。

    3. 非经严格验证,不建议随意改变检测试剂用量。

    4. 按照说明书分装储存检测试剂,保证试剂的稳定性。


  • 生物活性

    • 微分裂荧光素酶裂解型活性检测: HEK293 细胞接种于 96 孔白板透明底培养板,100µl/孔,细胞密度为 60-70%。转染带分裂酶小片段标签的目标分子表达质粒,每孔 0.2µg DNA,48 小时后按说明书检测 Nanoluc 荧光素酶活性,动态读板 2
      小时

    • *HEK293 细胞接种于 6 孔白板透明底培养板,细胞密度为 60-70%。转染带分裂酶小片段标签的目标分子表达质粒,每孔0.2µg DNA。48 小时后细胞酶消化,计数后系列稀释,铺于 96 孔反应板,按说明书检测 Nanoluc 荧光素酶活性。对照用未转染细胞。比对试剂盒为国外知名品牌同类产品。表中读数为 2 个重复孔的平均读数。

    • A: Fluc activity after R1 addition

      B: Remaining FLuc activity after R1+R2 addition

      C: Nluc activity after R1+(R2+Sub) addition

      Remaining Fluc actity afer R2 Addition (%)=0.037%

    • 稳定性测试

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