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UA-Glo^® Luminescent Kinase Assay

Datasheet COA

价格￥415.00 （ 1-2周）

货号 UA070098

规格

10ml100ml10*100ml

数量

产品介绍

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背景介绍

UA-Glo激酶发光检测试剂盒可以定量测定酶学实验中激酶的活性。该试剂盒通过定量检测激酶反应后剩余ATP的数量以确定激酶的活性：剩余ATP的数量和激酶活性呈负相关。使用该试剂盒时激酶反应中的ATP浓度最高可至10μM，使用UA-Glo激酶Plus发光检测试剂盒时激酶反应中的ATP浓度最高可至100μM, 而使用UA-Glo激酶Max发光检测试剂盒时激酶反应中的ATP浓度最高可至500μM。该试剂盒可以检测多数激酶，激酶底物包括多肽，蛋白，脂或糖等。该试剂盒可用于激酶抑制物的高通量均相筛选，并可以通过调整ATP浓度区分ATP竞争性和非竞争性抑制物。

产品规格

储存条件

干冰运输。-20℃及以下避光储存，有效期12个月。

产品组分

产品组成: 荧光素酶，荧光素，缓冲液混合后灌装于10 ml 或100 ml的棕色瓶中，规格如下：
规格
96-孔板反应数
384-孔板反应数
10 ml
200
1,000
100 ml
2,000
10,000
10 x 100 ml
20,000
100,000

操作步骤

1. 激酶反应
1) 在96孔或384孔白不透明实验板中进行激酶反应。建议96孔板反应体积为50μL，384孔板反应体积为10μL。可以在激酶反应中加入浓度梯度的测试化合物。
2) 激酶反应的激酶和底物浓度需要根据不同的激酶进行优化。在实验所需的适当信噪比的情况下，可以采用在信号线性反应范围的激酶浓度进行实验。
3) ATP的浓度: UA-Glo 激酶发光检测试剂盒最高可至10μM。
4) 激酶反应可以在通用反应缓冲液中进行（40mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mg/ml BSA, 20mM MgCl2）或采用文献报道的反应缓冲液和辅助因子。
5) 激酶反应的温度和时间需根据不同激酶而设定。进行化合物高通量筛选实验时，建议优化激酶反应于室温(22℃-25℃)进行，以利于在激酶活性测定过程中保持实验板的温度均一性。

2. 激酶活性测定
1) 取出UA-Glo 激酶发光检测试剂，平衡至室温。轻摇混匀。激酶活性发光检测试剂中的荧光素酶反应对温度变化敏感，试剂和实验板需要平衡到室温，测试过程温度保持恒定(±1℃)。
2) 如果激酶反应是在非室温，例如30℃进行的，实验板需平衡至室温。
3) 加50 µL的激酶发光检测试剂到 50 µL 96孔实验板中, 或10 µL激酶发光检测试剂到10 µL 384 孔实验板中，振荡混匀，放置暗处10分钟。
4) 读取luminescence信号。由于荧光信号非常稳定，如有需要，可以在加入检测试剂后3小时内读板。