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产品中心 酶制剂 试剂盒

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Tissue Digestion Kit II

价格 ￥2,475.00 （ 1-2周）
货号 UA070091
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产品介绍

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产品规格

  • 纯度

    ≥95% by SDS-PAGE

  • 内毒素含量

    <10 EU/mg

  • 储存条件

    This product should be stored at -20℃ and can be stored for at least 12 months.
    Avoid repeated freezing and thawing

背景介绍

  • 由重组胶原酶混合组分和耐热金属蛋白酶组成，其中重组胶原酶混合组分采用E.coli表达，对胶原蛋白特有的氨基酸序列Pro-X-Gly-Pro中的中性氨基酸 (X) 和甘氨酸之间的键具有特异性；耐热金属蛋白酶采用E.coli进行重组表达，可以水解疏水性氨基酸残基N-末端的蛋白质键。重组胶原酶混合组分和耐热金属蛋白酶均不含动物源成分，同时使用可以高效的消化肠道、心脏、肝脏、肾脏等动物器官，获得相对应的原代细胞。与采用胰蛋白酶的试剂盒相比，耐热金属蛋白酶的活性不受血清影响，更加适合在消化过程中需要加血清的场景。

产品组分

  • Components

    S

    M

    L

    Recombinant collagenase mixed components

    1.0ml×2

    4.0ml

    10.0ml

    Thermoresistant metalloproteinases

    1.0ml×6

    12.0ml

    30.0ml


    Size

    Collagenase activity

    Thermostable metalloproteinase activity

    S

    >3500CDU

    >600U

    M

    >7000CDU

    >1200U

    L

    >17500CDU

    >3000U



操作步骤

  • 小鼠肠道组织的消化，仅供参考：

    • 消化液配制：0.5ml重组胶原酶混合组分+1.5ml耐热金属蛋白酶，加4.0ml DMEM培养基稀释，并加FBS至终浓度3%，DNase I
    • 至终浓度100U/ml，青链双抗至终浓度0.1%；
    • 将小肠从组织保存液中取出，转移至10cm皿中，加入10ml预冷的PBS+1%青链双抗，涮洗2-3次；
    • 将涮洗后的小肠转移至新的装有10ml预冷的PBS+1%青链双抗的10cm皿中，用注射器前后冲洗3次，将小肠内容物去除干净；
    • 将冲洗干净后的小肠转移至新的装有10ml预冷的PBS+1%青链双抗的10cm皿中，用剪刀将小肠纵向剖开，用镊子将小肠表面绒
    • 毛等轻轻刮去；
    • 将小肠转移至新的装有10ml预冷的PBS+1%青链双抗的10cm皿中，将小肠剪成1cm长小段，转移至2ml EP管中，用剪刀适当
    • 剪碎；
    • 将剪碎后小肠转移至15ml离心管中，加入6ml 消化液，37℃水浴10min，中间5min时取出颠倒混匀静置片刻，取上清至50ml离心管中，补DMEM完培至20ml；
    • 沉淀中加入5ml DMEM+3% FBS 吹打数次，静置片刻，取上清与上一步的溶液合并；
    • 340g 4℃离心8min，弃上清后，用12.5ml PBS重悬过70µm细胞筛，往过筛后细胞中加入8ml DMEM完全培养基。
注意事项

  • This product should avoid repeated freezing and thawing. If there is any surplus, it is recommended to store it at -20℃

酶活定义
  • Collagenase activity definition: Within 5 hours, at pH 7.4, 37 °C and in the presence of calcium ions, the amount of enzyme that releases peptides from bovine Achilles tendon collagen and the ninhydrin color is equivalent to 1.0 µmol of leucine is 1 CDU. Thermostable metalloproteinase activity definition: at pH 7.5 and 37 °C, the amount of enzyme required to hydrolyze casein and produce 1.0 μM (181 μg) tyrosine per minute is 1U.

  • 生物活性

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