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产品中心 酶制剂 试剂盒

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Tissue Digestion Kit

价格 ￥1,750.00 （ 1-2周）
货号 UA070090
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产品介绍

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产品规格

  • 纯度

    ≥95% by SDS-PAGE

  • 内毒素含量

    <10 EU/mg

  • 储存条件

    This product should be stored at -20℃ and can be stored for at least 12 months.
    Avoid repeated freezing and thawing

背景介绍

  • 由重组胶原酶混合组分和重组猪胰蛋白酶组成，其中重组胶原酶混合组分采用E.coli表达，对胶原蛋白特有的氨基酸序列Pro-X-Gly-Pro中的中性氨基酸 (X) 和甘氨酸之间的键具有特异性；重组猪胰蛋白酶则采用毕赤酵母进行重组表达，可以特异性的切割蛋白质中赖氨酸和精氨酸的羧基端肽键。重组胶原酶混合组分和重组猪胰蛋白酶均不含动物源成分，同时使用可以高效的消化心脏，肝脏，肾脏等动物器官，获得相对应的原代细胞。

产品组分

  • Components

    S

    M

    L

    Recombinant collagenase mixed components

    1.0ml×2

    4.0ml

    10.0ml

    Recombinant porcine trypsin

    8.0ml

    16.0ml

    40.0ml



    Size

    Collagenase activity

    Trypsin activity

    S

    >3500CDU

    >25KU

    M

    >7000CDU

    >50KU

    L

    >17500CDU

    >125KU

操作步骤

  • 小鼠心脏组织的消化，仅供参考：

    • 将试剂盒中的重组胶原酶混合组分和重组猪胰蛋白酶两种溶液解冻后在无菌状态下按照按体积比1：4混合，配制成消化液，如需进一步稀释，可采用HBSS或者PBS缓冲液进行稀释。
    • 将小鼠心脏从组织保存液中取出，分别置于预冷的PBS（+2%青链双抗），洗涤2-3次。
    • 将组织上多余部分去除（如结缔组织，脂肪组织等）。
    • 将小鼠心脏剪碎（约3mm3），将移入离心管中，加入消化液1.5ml，37℃消化20分钟，每间隔10分钟左右移液枪吹打或颠倒混匀，使组织充分消化。此过程中需仔细检测消化情况，避免过度消化，必要时可对消化悬液进行镜检，以镜下观察到较多单细胞或较小的细胞簇（＜70µm）为宜。
    • 将消化悬液静置片刻，收集上清，在沉淀中加入1.5ml消化液，37℃消化20分钟，每间隔10分钟左右用移液枪吹打或颠倒混匀，使组织充分消化。
    • 重复上述步骤一次。
    • 合并收集的上清，加入5ml DMEM完全培养基终止消化，4℃，300g离心5分钟，弃上清。
    • 用5ml PBS（+1% 青链双抗）重悬细胞沉淀，过70µm细胞筛，4℃，300g离心5分钟。
    • 用5ml PBS（+1% 青链双抗）重悬细胞沉淀，4℃，300g离心5分钟，弃上清。
    • 用适当体积的DMEM完全培养基重悬细胞沉淀，置于细胞培养皿中培养。
注意事项

  • 如果需要更多的细胞团块而不是单细胞，建议缩短消化时间或者减少胰蛋白酶的比例；

    本品尽量避免反复冻融，如有剩余建议-20℃分装保存

酶活定义
  • Collagenase activity definition: Within 5 hours, at pH 7.4, 37 °C and in the presence of calcium ions, peptides are released from collagen of bovine Achilles tendon, and the amount of enzyme equivalent to 1.0 µmol of leucine in ninhydrin is 1 CDU. Trypsin activity definition: At 25 °C, pH 7.6, reaction system 3.2 ml (1 cm light path), the amount of enzyme that hydrolyzes BAEE per minute to increase the absorbance at 253 nm by 0.003 is defined as 1 U.

  • 生物活性

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