Mouse Neutrophil Isolation Kit (Column-Free)

步骤

操作说明

剂量和时间

1

取小鼠骨髓或外周血，制备单细胞悬液，进行细胞计数;

Note:小鼠外周血需使用红细胞裂解液Red Blood Cell Lysis Buffer (不含固定剂,1X)（cat:S0D9002）进行裂红处理; 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数;

制备样本

2

用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×10⁷细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测初始Mouse Neutrophil比例；

1×10⁷ cells/100 μL

3

加入10 μL Mouse Neutrophil Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL /100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 2-8℃孵育10 min；

2-8℃孵育10 min

5

震荡涡旋5-30 s，混匀Streptavidin beads；

混匀5-30 s

6

加15 μL Streptavidin beads至样品中；

15 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，2-8℃孵育15 min；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

本步骤磁珠会出现沉底的情况，可以在中间轻弹混匀两次；

2-8℃孵育15 min；

8

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

9

样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附（3 min）

联排磁力架吸附（5 min）

10

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note: 1. 0.1-1 × 10⁸ cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；

2-5 ×10⁸ cells（2-5mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5mL；

2. 若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒去除死细胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）;