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产品中心 无柱分选 阴性分选

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Human Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

价格 ￥6,000.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 S0K3014
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产品介绍

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产品规格

  • 反应种属 ?

    Human

  • 储存条件

    避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

  • 成分组成

    1 mL Human Naïve CD4 T Cell Biotin-Antibody Cocktail, PBS缓冲体系含BSA；

    1.5mL Streptavidin Beads，PBS缓冲体系含BSA及Poloxamer 188；

  • 分选能力

    适用于 1×10⁹ 总细胞量，最多可完成 100 次分选。

  • 分选原理

    在该负选流程中，通过生物素偶联的抗体标记非Human Naïve CD4 T细胞，再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育，非目的细胞通过抗体复合物与磁珠被标记，而目标Human Naïve CD4 T细胞保持未标记状态。随后将细胞悬液转移至聚苯乙烯试管中，并放置在分选器的磁场内。在磁场作用下，被磁性标记的非目标细胞吸附在试管管壁上，未被标记的Human Naïve CD4 T细胞则留存于上清液中。该上清液即为去除非目标细胞后的Human Naïve CD4 T细胞富集组分。

  • 分选应用

    从Human PBMC中分选出无标记天然状态的Naïve CD4 T细胞，可用于后续各类功能实验。

  • 磁珠粒径

    150 nm

  • 分选方式

    无柱分选

  • 分选策略

    阴性分选
背景介绍

  • Human Naïve CD4 T细胞的免疫表型为CD3⁺CD4⁺CD45RA⁺CD45RO⁻，是人体适应性免疫系统中负责初始抗原识别与定向分化的核心辅助T细胞前体群体，也是维持免疫稳态、介导特异性应答及形成免疫记忆的关键细胞亚群。Human Naïve CD4 T细胞阴选试剂盒基于免疫磁珠阴性分选技术研发，摒弃阳性分选的抗体结合标记缺陷，通过特异性去除非目标细胞（如CD8 T细胞、NK细胞、B细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞及记忆性T细胞等），获得无标记、原生状态的高纯度Naïve CD4 T细胞，完美保留细胞初始静息状态、表面分子完整性与多向分化潜能，适配体外活化增殖、亚群定向分化诱导、细胞因子分泌检测等各类功能实验，成为目前人Naïve CD4 T细胞分离的主流科研工具。

操作步骤

  • Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为 S0D3018

    步骤

    操作说明

    剂量和时间

    1

    从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数；

    Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；PBMC可以采用400 g离心7 min；

    制备样本

    2

    用100 μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞；

    Note: 试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human Naïve CD4 T细胞比例；

    1×107 cells/100 μL

    3

    加入10 μL Human Naïve CD4 T Cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀。

    Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

    10 μL /100 μL

    4

    Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min；

    室温孵育10 min

    5

    震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads；

    混匀5-30 s

    6

    加15 μL Streptavidin beads至样品中；

    15 μL/100 μL

    7

    轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育8 min；

    Note: 本步骤混匀可以采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

    本步骤中磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5 min时，再次混匀一下；

    室温孵育8 min

    8

    加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

    总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

    总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

    9

    样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

    单孔磁力架吸附（3 min）

    联排磁力架吸附（5 min）

    10

    倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

    Note: 分选的细胞可采用400 g离心7 min，用于后续培养和分析。

    细胞分选成功

    Note: 1. 0.1-1 × 108 cells（0.1-1 mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5 mL；

    2-5 ×108 cells（2-5 mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5 mL；

    2. 若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒去除死细胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）；


  • 验证数据

    • 采用Human Naïve CD4 T Cell无柱式分选试剂盒，从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Naïve CD4 T细胞。分选后细胞使用CD3-FITC(Clone: UCHT1)、CD4-Alexa Fluor® 647 (Clone: OKT4)、CD45RA-PE-Cy7 (Clone: HI100)、CD45RO-Pacific Blue (Clone: UCHL1)荧光抗体进行染色，以活细胞（Live⁺）设门进行分析, 检测分选组分中Naïve CD4 T细胞的比例。流式细胞术检测结果表明，本次分选后CD3⁺CD4⁺细胞中CD45RA⁺CD45RO⁻细胞纯度为92.5%。

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