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产品中心 无柱分选 阳性分选

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Streptavidin Nanobeads（120 nm）

价格 ￥1,500.00 （ 1-2周）
货号 S0K3012
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产品介绍

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产品规格

  • 反应种属 ?

    Human, Mouse

  • 储存条件

    避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

  • 成分组成

    偶联链霉亲和素的四氧化三铁纳米磁珠，PBS缓冲体系含BSA及proclin 300。

  • 分选原理

    使用生物素化的一抗或配体对细胞进行染色，用Streptavidin Nanobeads（120 nm）对细胞进行磁性标记，随后将细胞悬液转移至聚苯乙烯试管中，并放置在分选器的磁场内。在磁场作用下，被磁性标记的细胞吸附在试管管壁上，未被标记的标细胞则留存于上清液中，收集上清后被磁性保留的细胞可被洗脱下来。

  • 分选方式

    无柱分选

  • 分选策略

    阳性分选
背景介绍

  • Streptavidin Nanobeads（120 nm）旨在根据生物素化抗体或配体标记的表面标志物对细胞进行分离。

操作步骤
  • Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为 S0D3018

    以Mouse T无柱阴选为例

    Note: 为了达到更好的分选效果和细胞得率，不同的抗体用量需要自行进行磁珠用量摸索。

    步骤

    操作说明

    剂量和时间

    1

    取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；裂红处理后进行细胞计数;

    Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；脾细胞可以采用400 g离心7 min；

    制备样本

    2

    用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

    Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测初始Mouse T比例；

    1×107 cells/100 μL

    3

    加入10 μL Mouse T cell Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀；

    Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

    10 μL /100 μL

    4

    Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 室温孵育10 min；

    室温孵育10 min

    5

    震荡5-30 s，混匀Streptavidin Nanobeads（120 nm）；

    混匀5-30 s

    6

    加5 μL Streptavidin Nanobeads（120 nm）至样品中；

    5 μL/100 μL

    7

    轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5min；

    Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

    本步骤磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5min时，轻弹混匀一下；

    室温孵育5min

    8

    加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在环形磁极上，防止磁珠大量沉底；

    总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

    9

    样品置于环形磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

    吸附10 min

    10

    倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

    Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

    细胞分选成功

    Note: 0.1-1 × 10^8 cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；


  • 验证数据

    • 采用Streptavidin Nanobeads（120 nm）和Mouse T cell Biotin Antibody Cocktail，从小鼠脾细胞中富集T细胞。使用CD19- Alexa Fluor® 647 (SDT Cat: S0B5445)、CD3- Alexa Fluor® 488 (SDT Cat: S0B8364)荧光抗体进行染色，以活细胞（Live+）设门进行分析, 检测分选组分中T细胞的比例；流式细胞术检测结果表明，本次分选后T细胞纯度为98.4%。

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