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产品中心 无柱分选 阴性分选

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Human Pan Monocyte Cell Isolation Kit (Column-Free)

价格 ￥5,500.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 S0K3010
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产品介绍

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产品规格

  • 反应种属 ?

    Human

  • 储存条件

    避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

  • 成分组成

    1 mL Human Pan Monocyte Cell Biotin-Antibody Cocktail

    0.5 mL Human FcR

    1mL Streptavidin Beads

  • 分选能力

    适用于 1×10⁹ 总细胞量，最多可完成 100 次分选。

  • 分选原理

    在该负选流程中，通过生物素偶联的抗体标记非Human Pan Monocyte（CD14+CD16+）细胞，再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育，非目的细胞通过抗体复合物与磁珠被标记，而目标Human Pan Monocyte（CD14+CD16+）细胞保持未标记状态。随后将细胞悬液转移至聚苯乙烯试管中，并放置在分选器的磁场内。在磁场作用下，被磁性标记的非目标细胞吸附在试管管壁上，未被标记的Human Pan Monocyte（CD14+CD16+）细胞则留存于上清液中。该上清液即为去除非目标细胞后的Human Pan Monocyte（CD14+CD16+）细胞富集组分。

  • 磁珠粒径

    150 nm

  • 分选方式

    无柱分选

  • 分选策略

    阴性分选
背景介绍

  • 单核细胞是人体固有免疫重要髓系细胞亚群，可分化为巨噬细胞、树突状细胞，参与机体炎症应答、抗原递呈、免疫调控及组织修复等生理病理过程，是免疫学机制探究、细胞功能实验、炎症模型构建的常用研究对象。人单核细胞依据表面 CD14、CD16分子表达差异，可划分为经典型、中间型与非经典型亚群，CD14+CD16 + 单核细胞为关键功能亚型，广泛参与炎症反应、抗原提呈、免疫调控及病原体清除，在感染、自身免疫病、肿瘤相关免疫研究中具备重要研究价值。

    本试剂采用免疫磁珠分选技术，特异性剔除淋巴细胞、粒细胞、红细胞等杂细胞，高效富集人CD14+CD16 + 阳性泛单核细胞。分选过程温和，不激活细胞、不损伤表面标志物，完整保留细胞原始生物学特性与生理活性。分离所得细胞纯度高、活性稳定，适用于细胞分型鉴定、极化诱导、细胞因子分泌检测、体外功能验证及疾病机理探究等实验，适配免疫学基础研究与临床前相关试验使用场景。

操作步骤
  • Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为 S0D3018

    步骤

    操作说明

    剂量和时间

    1

    从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离 PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数；

    Note: 推荐细胞采用 AO/PI 染色后进行计数；PBMC可以采用400g离心7min；

    制备样本

    2

    用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

    Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human Pan Monocyte细胞比例；

    1×107 cells/100 μL

    3

    加入5 μL Human FcR至样品中，轻轻混匀；

    5μL/100 μL

    4

    加入10 μL Human Pan Monocyte cell Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀。

    Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

    10 μL/100 μL

    5

    Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min；

    室温孵育10 min

    6

    震荡5-30 s混匀Streptavidin beads；

    震荡5-30 s

    7

    加10 μL Streptavidin beads至样品中；

    10 μL/100 μL

    8

    轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5min；

    Note: 本步骤混匀可以采用移液器轻轻吹匀 2-3 下；

    本步骤中磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5min时，再次混匀一下；

    室温孵育5min

    9

    加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

    总体积加至2.5 mL（5 mL 流式管）

    总体积加至7.5 mL（15 mL 离心管）

    10

    样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

    单孔磁力架吸附（3 min）

    联排磁力架吸附（5 min）

    11

    倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

    Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

    细胞分选成功

    Note: 0.1-1 × 10^8 cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；

    2-5 × 10^8 cells（2-5mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5mL；


  • 验证数据

    • 从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Human Pan Monocyte细胞，分选后细胞经CD14-Alexa Fluor® 488 (SDT Cat: S0B8022)和CD16-Alexa Fluor® 647 (SDT Cat: S0B85525)荧光染色后，以活细胞（Live+）设门进行分析, 流式细胞术检测结果表明，本次分选后Human Pan Monocyte(CD14+CD16+)细胞纯度为92.87%。

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