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T Cell Activation/Expansion Kit, mouse（RUO）

Datasheet COA

价格￥2,500.00 （供应商现货： 3-5个工作日）

货号 S0K1016

规格

200T

数量

产品介绍

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产品规格

反应种属 ?

Mouse
储存条件

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。
成分组成

2 mL Streptavidin NanoBeads, PBS缓冲体系含BSA及Poloxamer 188；
0.4 mL CD3ε-Biotin, mouse (100 µg/mL), PBS缓冲体系含BSA；
0.4 mL CD28-Biotin, mouse (100 µg/mL)，PBS缓冲体系含BSA；
分选能力

可激活2×10⁸个T细胞；
分选原理

本试剂盒用于体外小鼠T细胞的活化与扩增，核心由链霉亲和素磁珠、生物素标记小鼠CD3ε/CD28 抗体组成。
将生物素化CD3ε、CD28 抗体结合至链霉亲和素纳米磁珠表面后，磁珠可模拟抗原提呈细胞，刺激脾脏、淋巴结单细胞悬液或纯化静息T细胞的活化；培养至第6–8天可再次刺激，实现T细胞的大量扩增。
分选应用

本产品仅用于科研实验，不可用于临床诊断与治疗。
磁珠粒径

150 nm

背景介绍

Mouse T淋巴细胞是适应性免疫系统的核心效应细胞，主要分为CD4+辅助性T细胞与CD8+细胞毒性T细胞，在抗感染免疫、肿瘤免疫、免疫调节及自身免疫病发生过程中发挥关键作用。生理状态下，小鼠脾脏、淋巴结中的初始T细胞处于静息休眠状态，几乎不增殖、低表达功能分子，无法直接开展体外功能实验。因此，体外可控的T细胞活化与规模化扩增是小鼠免疫机制研究、细胞功能验证、免疫模型构建的核心基础技术；本试剂盒采用人工模拟抗原提呈细胞技术，通过生物素化CD3ε、CD28抗体偶联抗生物素磁珠，在体外精准复刻T细胞活化双信号，实现多克隆T细胞非特异性高效活化与扩增，适用于小鼠总T细胞、CD4 T、CD8 T细胞的批量扩增。磁珠作为固相载体，可同时富集大量CD3ε与CD28抗体，稳定结合T细胞表面对应受体，持续、均衡地提供第一信号与第二信号，规避天然抗原提呈的不稳定性，解决小鼠原代T细胞体外难活化、增殖弱的种属特异性问题，大幅提升活化效率与扩增倍数。

操作步骤

1. 实验试剂

1.1 缓冲液：pH7.2 PBS 缓冲液，添加 2 mM EDTA，2–8℃预冷；禁止使用含钙、镁离子的缓冲液/培养基;

1.2 细胞培养基: RPMI 1640，添加 10% 胎牛血清（FBS）+IL-2（终浓度 30–100 IU/mL）;可选添加50-100 μM β-巯基乙醇，维持快速增殖状态下细胞活力;

2. 磁珠偶联（偶联 CD3ε/CD28 抗体）

磁珠不含防腐剂，分装操作全程无菌；建议单次偶联500μL磁珠，偶联后磁珠2–8℃可稳定保存3个月，无需洗去未结合抗体。

2.1 取 2 mL无菌离心管，加入 100 μL CD3ε-Biotin + 100 μL CD28-Biotin，充分吹打混匀；

2.2 加入300 μL 缓冲液（pH7.2 PBS含2 mM EDTA）混匀；

2.3 充分涡旋重悬磁珠，保证磁珠均匀分散；吸取 500 μL Streptavidin NanoBeads加入上述抗体混合液，总体积1 mL；

2.4 将离心管置于旋转架，2–8℃低速持续旋转孵育1 h；得到偶联的CD3ε/CD28的磁珠，后续可直接使用；

3. 实验步骤

所有操作全程无菌环境。

3.1 样本制备

脾脏来源静息小鼠T细胞活化扩增，制备淋巴器官（脾脏、淋巴结）单细胞悬液。可使用磁珠分选T细胞进行活化扩增：阳性分选 CD3/CD4/CD8 T 细胞：CD3ε Nanobeads Kit, mouse (RUO) (Cat. No. S0K0015); CD4 Nanobeads, Mouse (RUO) (Cat. No. S0K0003); CD8 Nanobeads, Mouse (RUO) (Cat. No. S0K0005); 阴性分选CD3 /CD4/CD8 T细胞：Mouse T Cell Isolation Kit (Cat. No. S0K1008/S0K3006); Mouse CD4 T Cell Isolation Kit (Cat. No. S0K1005/S0K3003); Mouse CD8 T Cell Isolation Kit (Cat. No. S0K1007/S0K3004).

具体操作参照对应产品说明书

3.2T 细胞活化与扩增操作

本方案基础体系适用于1×10⁶个分选后的T细胞对应20 μL偶联后的磁珠，细胞量翻倍时所有试剂体积同步放大。

3.2.1 取分选后的细胞按1×10⁶/mL重悬在新鲜完全培养基（RPMI1640 +10% FBS +30–100 IU/mL IL-2）中, 取1mL细胞至离心管中，充分混匀偶联磁珠，加入20 μL偶联的磁珠，400 g 离心7 min；（阴性对照：使用未偶联空白磁珠替代偶联磁珠；）

3.2.2 离心完，弃上清，沉淀重悬于1 mL新鲜完全培养基（RPMI1640 +10% FBS +30–100 IU/mL IL-2）,将细胞加入对应的孔板中培养，为保证最佳刺激与增殖效果，推荐使用铺板标密度：1×10⁶细胞 /cm²；

各培养板最优培养体系配比表

培养板型号	生长底面积	培养总体积	T 细胞接种数量	偶联磁珠的用量
96 孔板	0.31cm²	0.2 mL	0.25×10⁶	5 μL
48 孔板	1 cm²	1 mL	1×10⁶	20 μL
24 孔板	2 cm²	2 mL	2×10⁶	40 μL
12 孔板	4 cm²	4 mL	4×10⁶	80 μL
6 孔板	10 cm²	5 mL	5×10⁶	100 μL

3.2.3 将培养板置于CO₂培养箱中培养，每日观察细胞状态，培养基不足及时补加；

3.2.4 培养至第2天，轻柔吹散细胞团块，此步可取样进行流式检测mouse CD25, mouse CD69看细胞激活情况;

3.2.5 传代扩增：每2天按 1:2 或 1:4 比例分瓶，补充新鲜培养基，增殖过快可缩短传代间隔;

3.2.6 二次刺激：活化培养 6–8 天后，T 细胞进入静息状态，如需持续扩增需再次加磁珠重刺激。

3.3 磁珠去除操作

若下游需进行磁珠分选、更换刺激抗原、刺激剂时，需提前去除磁珠：

3.3.1 收集细胞转移至 5/15/50 mL 离心管，缓冲液洗涤一次；

3.3.2 缓冲液重悬细胞，最高浓度 2×10⁷细胞/mL，充分吹散混匀；

3.3.3 将离心管固定于磁力分离器上，静置吸附10 min;

3.3.4 将细胞转移至新离心管，收集得到无磁珠的细胞，可开展后续实验。

验证数据
- 小鼠脾脏细胞经分选后得到的mouse T, CD4 T 和CD8 T，采用T Cell Activation/Expansion Kit, mouse刺激活化，培养2天后，通过CD25-Alexa Fluor647 (SDT Cat: S0B1545)、CD69-Alexa Fluor488(SDT Cat: S0B8295)活化标志物进行抗体染色，流式检测结果显示：磁珠激活后的T 细胞活化标志物阳性表达率显著上调，细胞活化水平高。
- 小鼠脾脏细胞经分选后得到的Mouse T, CD4 T 和CD8 T经T Cell Activation/Expansion kit, mouse激活后培养7天；
  T细胞完全培养基：RPMI1640基础培养基，添加10% FBS、50IU/mL IL2和50μM β-巯基乙醇；
  接种密度：0.5×10⁶ / mL。
  培养至第7天细胞扩增曲线。

T Cell Activation/Expansion Kit, mouse（RUO）

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储存条件

成分组成

分选能力

分选原理

分选应用

磁珠粒径

验证数据