热搜词：
注册
登录
CN
  • CN
  • EN

产品中心 有柱分选 阴性分选

所有图片（1/1）

Human Pan Monocyte Cell Isolation Kit (Column-Based)

价格 ￥6,000.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 S0K1012
规格
数量
收藏 分享
产品介绍

产品介绍 评论(0)

产品规格

  • 反应种属 ?

    Human

  • 储存条件

    避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

  • 成分组成

    1 mL Human Pan Monocyte Cell Biotin-Antibody Cocktail

    0.5 mL Human FcR

    1 mL Streptavidin Beads

  • 分选能力

    适用于1×10⁹总细胞量，最多可完成100次分选。

  • 分选原理

    在该负选流程中，通过生物素偶联的抗体标记非Pan Monocyte（CD14+CD16+）细胞，再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育，非目的细胞通过抗体复合物与磁珠被标记，而目标Pan Monocyte（CD14+CD16+）细胞保持未标记状态。随后将细胞悬液转移至分选柱上，在磁场作用下，被磁性标记的非目标细胞吸附在分选柱中，未被标记的Pan Monocyte（CD14+CD16+）细胞在重力作用下滴落到收集管中，该上清液即为去除非目标细胞后的Pan Monocyte（CD14+CD16+）细胞富集组分。

  • 磁珠粒径

    20 nm

  • 分选方式

    有柱分选

  • 分选策略

    阴性分选
背景介绍

  • 单核细胞是人体固有免疫重要髓系细胞亚群，可分化为巨噬细胞、树突状细胞，参与机体炎症应答、抗原递呈、免疫调控及组织修复等生理病理过程，是免疫学机制探究、细胞功能实验、炎症模型构建的常用研究对象。人单核细胞依据表面 CD14、CD16分子表达差异，可划分为经典型、中间型与非经典型亚群，CD14+CD16 + 单核细胞为关键功能亚型，广泛参与炎症反应、抗原提呈、免疫调控及病原体清除，在感染、自身免疫病、肿瘤相关免疫研究中具备重要研究价值。

    本试剂采用免疫磁珠分选技术，特异性剔除淋巴细胞、粒细胞、红细胞等杂细胞，高效富集人CD14+CD16 + 阳性泛单核细胞。分选过程温和，不激活细胞、不损伤表面标志物，完整保留细胞原始生物学特性与生理活性。分离所得细胞纯度高、活性稳定，适用于细胞分型鉴定、极化诱导、细胞因子分泌检测、体外功能验证及疾病机理探究等实验，适配免疫学基础研究与临床前相关试验使用场景。

操作步骤

  • Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为 S0D3018

    以L Separation Column为例

    步骤

    操作说明

    剂量和时间

    细胞处理及标记

    1

    从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离 PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数。

    Note: 推荐细胞采用 AO/PI 染色后进行计数；PBMC可以采用400 g离心7 min；

    制备样本

    2

    用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

    Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human Pan Monocyte细胞比例；

    1×107 cells/100 μL

    3

    加入5 μL Human FcR至样品中，轻轻混匀；

    5μL/100 μL

    4

    加入10 μL Human Pan Monocyte cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀；

    Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

    10 μL/100 μL

    5

    Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min；

    室温孵育10 min

    6

    加入10倍细胞体积的MagSep Separation Buffer洗涤细胞，400g离心7min后去上清，重悬至原体积；

    400g离心7min

    7

    混匀Streptavidin Beads，加10 μL Streptavidin Beads至样品中；

    10 μL/100 μL

    8

    轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5 min；

    室温孵育5 min

    细胞分选

    9

    在柱分选磁极中，装上L Separation Column，加入3 mL MagSep Separation Buffer，润洗分选柱；

    润洗分选柱

    10

    将细胞加入到分选柱中，并用收集管收集目的细胞；

    Note: 细胞体积最少为500 μL，不足则用MagSep Separation Buffer补齐；随重力滴落的细胞为目的细胞；

    收集目的细胞

    11

    加入3 mL MagSep Separation Buffer，收集目的细胞；

    Note: 本步骤洗脱分选柱未标记的目的细胞，提高得率。

    收集目的细胞

    Notes: 注意分选柱的最大承载量，S Separation Column标记细胞数最大为1×107；L Separation Column最大标记细胞数为1×108；


  • 验证数据

    • 从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Human Pan Monocyte细胞，分选后细胞经CD14-Alexa Fluor® 488 (SDT Cat: S0B8022)和CD16-Alexa Fluor® 647 (SDT Cat: S0B85525)荧光染色后，以活细胞（Live+）设门进行分析, 流式细胞术检测结果表明，本次分选后Human Pan Monocyte(CD14+CD16+)细胞纯度为90.95%。

评论(0)