Mouse Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Based)

步骤

操作说明

剂量和时间

细胞处理及标记

1

取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液，裂红处理后进行细胞计数;

Note: 推荐细胞采用 AO/PI 染色后进行计数；脾细胞可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×10⁷细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整； 留分选前样本检测naïve CD4比例；

1×10⁷ cells/100 μL

3

加入10 μL Mouse Naive CD4 T cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL/100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育 , 室温孵育10 min；

室温孵育10 min

5

加入10倍细胞体积的MagSep Separation Buffer洗涤细胞，400g离心7min后去上清，重悬至原体积；

400g离心7min

6

混匀Streptavidin Beads，加10 μL Streptavidin Beads至样品中；

10 μL/100 μL

7

混匀Mouse CD44 Nanobeads，加10 μL Mouse CD44 Nanobeads至样品中；

10 μL/100 μL

8

轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5 min；

室温孵育5 min

细胞分选

9

在柱分选磁极中，装上L Separation Column，加入 3 mL MagSep Separation Buffer，润洗分选柱；

润洗分选柱

10

将细胞加入到分选柱中，并用收集管收集目的细胞；

Note: 细胞体积最少为500 μL，不足则用MagSep Separation Buffer补齐；随重力滴落的细胞为目的细胞；

收集目的细胞

11

加入3 mL MagSep Separation Buffer，收集目的细胞；

Note: 本步骤洗脱分选柱未标记的目的细胞，提高得率。

收集目的细胞

Notes: 1. 注意分选柱的最大承载量，S Separation Column标记细胞数最大为1×10⁷；L Separation Column最大标记细胞数为1×10⁸；

2. 若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒去除死细胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）;