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产品中心 有柱分选 阳性分选

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CD19 Nanobeads, mouse（RUO）

价格 ￥1,250.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 S0K0024
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产品介绍

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产品规格

  • 反应种属 ?

    Mouse

  • 储存条件

    避光保存于2–8℃，不可冻存。

  • 成分组成

    偶联抗鼠CD19单抗的葡聚糖包覆的四氧化三铁纳米磁珠

  • 分选能力

    1 mL磁珠：适用于5×108总细胞量，最多可完成50次分选。

    2 mL磁珠：适用于1×109总细胞量，最多可完成100次分选。

  • 分选原理

    采用CD19 Nanobeads, mouse对CD19⁺细胞进行磁性标记。随后将细胞悬液上样至置于分选器磁场中的分选柱内。被磁性标记的CD19⁺细胞将滞留于柱内，未标记的细胞则流出，该组分即为去除CD19⁺细胞后的阴性组分。将分选柱移出磁场后，被磁捕获的CD19⁺细胞可洗脱获得，即为阳性分选组分。

  • 分选应用

    从小鼠脾脏单细胞悬液中分离或去除CD19+细胞。

  • 磁珠粒径

    20 nm

  • 分选方式

    有柱分选

  • 分选策略

    阳性分选
背景介绍

  • Mouse CD19由Cd19基因编码，为免疫球蛋白超家族 Ⅰ 型跨膜糖蛋白，是 B 细胞谱系经典标志物。该分子自骨髓 pro-B 细胞阶段开始表达，持续表达于绝大多数成熟 B 细胞，终末分化浆细胞则下调 CD19。

操作步骤
  • Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为 S0D3018

    以S Separation Column为例

    步骤

    操作方法

    剂量 / 时间

    磁性标记

    1

    取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；裂红处理后进行细胞计数

    Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数

    —

    2

    细胞悬液400×g离心7分钟，完全吸弃上清

    400×g,7 min

    3

    每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬

    Note: 缓冲液用量根据样品体积等比例调整

    重悬细胞

    4

    每1×10⁷细胞加20 μL CD19 Nanobeads, mouse

    Note：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加

    1×10⁷细胞加 20 μL

    5

    充分混匀，2–8℃避光孵育15min

    孵育15 min

    6

    每1×10⁷细胞加1 mL缓冲液洗涤，400×g 离心7分钟，完全吸弃上清

    1×10⁷细胞加1 mL

    7

    500 μL缓冲液最多重悬1×108细胞

    重悬细胞

    磁性分选

    8

    将S型分选柱放入对应磁力分选器磁场中，500 μL缓冲液润洗分选柱

    润洗分选柱

    9

    将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞）

    —

    10

    缓冲液洗涤柱子3次，每次500μL，待柱内液体完全流空后再加下一次

    3×500 μL缓冲液

    11

    合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上

    —

    12

    向柱内加入1mL缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞

    Note：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次

    收集目的细胞


    以L Separation Column为例

    步骤

    操作方法

    剂量 / 时间

    磁性标记

    1

    取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；裂红处理后进行细胞计数

    Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数

    —

    2

    细胞悬液400×g离心7分钟，完全吸弃上清

    400×g,7 min

    3

    每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬

    Note: 缓冲液用量根据样品体积等比例调整

    重悬细胞

    4

    每1×10⁷细胞加20 μL CD19 Nanobeads, mouse

    Note：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加

    1×10⁷细胞加 20 μL

    5

    充分混匀，2–8℃避光孵育15min

    孵育15 min

    6

    每1×10⁷细胞加1 mL缓冲液洗涤，400×g离心7分钟，完全吸弃上清

    1×10⁷细胞加1 mL

    7

    500 μL缓冲液最多重悬1×108细胞

    重悬细胞

    磁性分选

    8

    将L型分选柱放入对应磁力分选器磁场中，3 mL缓冲液润洗分选柱

    润洗分选柱

    9

    将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞）

    —

    10

    缓冲液洗涤柱子3次，每次3 mL，待柱内液体完全流空后再加下一次

    3×3 mL缓冲液

    11

    合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上

    —

    12

    向柱内加入5mL缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞

    Note：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次

    收集目的细胞


  • 验证数据

    • 使用CD19 Nanobeads Kit, mouse、S或L Separation Column及磁性分选器从小鼠脾脏中富集或去除CD19+细胞。随后使用Alexa Fluor® 647 anti-mouse CD19 Antibody (6D5)及Brilliant Violet 421™ anti-mouse CD3 Antibody (Clone:17A2)进行荧光染色，并圈选活细胞群进行分析。

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