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产品中心 有柱分选 阳性分选

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CD3ε Nanobeads Kit, mouse (RUO)

价格 ￥2,000.00 （ 供应商现货 ： 3-5个工作日）
货号 S0K0015
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产品介绍

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产品规格

  • 反应种属 ?

    Mouse

  • 储存条件

    避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

  • 成分组成

    生物素标记的抗小鼠CD3ε单克隆抗体及与链霉亲和素偶联的纳米磁珠，PBS 缓冲体系含 BSA 及Poloxamer 188。

  • 分选能力

    1 mL磁珠：适用于 5×10⁸ 总细胞量，最多可完成 50 次分选。

    2 mL磁珠：适用于 1×10⁹ 总细胞量，最多可完成 100 次分选。

  • 分选原理

    首先，用CD3ε-生物素标记的一抗对CD3ε+细胞进行标记。随后，使用生物素纳米磁珠对细胞进行磁标记。然后，将细胞悬液置于在磁场中的分选柱内。经磁珠标记的CD3ε+细胞被保留在分选柱内。未标记的细胞则流经分选柱；因此，达到细胞组分中的CD3ε+细胞分离。

  • 磁珠粒径

    20 nm

  • 分选方式

    有柱分选

  • 分选策略

    阳性分选
背景介绍

  • CD3ε是一种分子量为20 kDa的跨膜蛋白，也是T细胞受体（TCR）复合体的亚单位。它与CD3的γ亚单位和δ亚单位共同参与TCR复合体的组装和表达，对这一过程至关重要。CD3 表达于胸腺细胞、成熟 T 淋巴细胞及自然杀伤 T 细胞（NKT 细胞）的表面。使用 CD3ε 纳米微球试剂盒，可从脾脏、胸腺和淋巴结等多种组织中去除小鼠 T 淋巴细胞和 NKT 细胞。

操作步骤
  • Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为 S0D3018

    以S Separation Column为例

    步骤

    操作方法

    剂量 / 时间

    磁性标记

    1

    计数细胞总数

    —

    2

    细胞悬液400×g 离心7分钟，完全吸弃上清

    400×g,7 min

    3

    每1×10⁷细胞加95 μL缓冲液重悬

    注：缓冲液需现配现用

    重悬细胞

    4

    每1×10⁷细胞加5 μL CD3ε-Biotin

    注：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加

    1×10⁷细胞加 5 μL

    5

    充分混匀，2–8 ℃避光孵育10min

    10 min

    6

    每 1×10⁷细胞加 1 mL缓冲液洗涤，400×g 离心7分钟，完全吸弃上清

    1×10⁷细胞加1 mL 400×g，7 min

    7

    每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬

    重悬细胞

    8

    每1×10⁷细胞加20 μL Streptavidin Beads

    注：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加

    1×10⁷细胞加 20 μL

    9

    充分混匀，2–8 ℃避光孵育15min 

    15 min

    10

    500 μL缓冲液最多重悬1.25×10⁸细胞

    重悬细胞

    磁性分选

    11

    将S型分选柱放入对应磁力分选器磁场中

    —

    12

    缓冲液润洗分选柱

    500 μL 缓冲液

    13

    将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞）

    —

    14

    缓冲液洗涤柱子3次，待储液池完全流空后再加下一次

    3×500 μL缓冲液

    15

    合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上

    —

    16

    向柱内加入缓冲液，用配套推杆快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞

    注：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次

    1 mL缓冲液


    以D Separation Column为例

    步骤

    操作方法

    剂量 / 时间

    磁性标记

    1

    计数细胞总数

    —

    2

    细胞悬液400×g 离心7分钟，完全吸弃上清

    400×g,7 min

    3

    每1×10⁷细胞加95 μL缓冲液重悬

    注：缓冲液需现配现用

    重悬细胞

    4

    每1×10⁷细胞加5 μL CD3ε-Biotin

    注：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加

    1×10⁷细胞加 5 μL

    5

    充分混匀，2–8 ℃避光孵育10min

    10 min

    6

    每 1×10⁷细胞加 1 mL缓冲液洗涤，400×g 离心7分钟，完全吸弃上清

    1×10⁷细胞加1 mL 400×g，7 min

    7

    每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬

    重悬细胞

    8

    每1×10⁷细胞加20 μL Streptavidin Beads

    注：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加

    1×10⁷细胞加 20 μL

    9

    充分混匀，2–8 ℃避光孵育15min 

    15 min

    10

    500 μL缓冲液最多重悬1.25×10⁸细胞

    重悬细胞

    磁性分选

    11

    将D型分选柱放入对应磁力分选器磁场中

    —

    12

    缓冲液润洗分选柱

    3 mL 缓冲液

    13

    将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞）

    —

    14

    缓冲液洗涤柱子3次，待储液池完全流空后再加下一次

    3×3 mL缓冲液

    15

    合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上

    —

    16

    向柱内加入缓冲液，用配套推杆快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞

    注：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次

    5 mL缓冲液


  • 验证数据

    • 使用CD3ε Nanobeads Kit, mouse、S（D）分选柱和分选器，从该单细胞悬液中分离了CD3ε阳性细胞。用抗CD3ε+（克隆号：S-R491）Alexa Fluor® 488（SDT Cat：S0B5473）抗体对细胞进行荧光染色，并筛选出“活细胞+”群。

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